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Real-Time-PCR-Mastermixe

Die Echtzeit-PCR (qPCR) ermöglicht den Nachweis und die Quantifizierung von Zielnukleinsäuren. PCR-Mastermixe können verwendet werden, um das Kontaminationsrisiko und andere Fehler beim Pipettieren und Mischen zu reduzieren.

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Thermo Scientific™ dNTP-Gemisch (jeweils 25 mM)

Häufig gestellte Fragen

Ein Mastermix für die Echtzeit-PCR ist eine vorgefertigte Lösung, die die meisten für die PCR-Reaktion benötigten Komponenten enthält, wie z.B. DNA-Polymerase, dNTPs, MgCl2, Puffer und manchmal fluoreszierende Farbstoffe, um Konsistenz und Effizienz im Amplifikationsprozess zu gewährleisten.

Die Komponenten eines Mastermixes für die RT-PCR umfassen:

  • DNA-Polymerase: Ein Enzym zur Synthese neuer DNA-Stränge.
  • dNTPs (Desoxynukleotid-Triphosphate): Bausteine für die neue DNA-Synthese.
  • MgCl2 (Magnesiumchlorid): Ein Cofaktor, der für die Aktivität der DNA-Polymerase erforderlich ist.
  • Puffer: Hält die optimalen pH- und Salzbedingungen für die Reaktion aufrecht.
  • Fluoreszierender Farbstoff (z.B. SYBR Green oder TaqMan-Sonden): Zur Echtzeit-Detektion der DNA-Amplifikation.
  • RNase-Inhibitor: Verhindert den Abbau von RNA (falls die reverse Transkription eingeschlossen ist).
  • Reverse Transkriptase: Enzym zur Synthese von cDNA aus RNA (für die RT-PCR).
  • Primer: Kurze DNA-Sequenzen, die die DNA-Synthese initiieren.

Diese Komponenten werden in spezifischen Verhältnissen kombiniert, um eine effiziente und genaue Amplifikation der Ziel-DNA/RNA zu gewährleisten.

 

Beim Kauf von RT-PCR-Mastermixen sollten Sie die folgenden fünf Faktoren berücksichtigen:

  • Stellen Sie sicher, dass der Mastermix mit Ihrem spezifischen Echtzeit-PCR-Instrument und Ihren Anwendungen kompatibel ist.
  • Suchen Sie nach Mixen, die eine hohe Sensitivität und Spezifität bieten, um Ziele mit geringer Häufigkeit zu erkennen und zwischen ähnlichen Sequenzen zu unterscheiden.
  • Überprüfen Sie die Stabilität und Haltbarkeit, um sicherzustellen, dass der Mix über die Zeit und unter Lagerbedingungen wirksam bleibt.
  • Bevorzugen Sie gebrauchsfertige Mixe, die die Vorbereitungsschritte minimieren und das Risiko von Fehlern reduzieren.
  • Gleichen Sie die Kosten mit den Leistungsmerkmalen ab, unter Berücksichtigung Ihres Budgets und des Umfangs Ihrer Experimente.

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