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Thermo Scientific™ Uracil-DNA-Glykosylase, hitzelabil
Artikelnummer. 15910213
Marke: Thermo Scientific™ 78310100UN
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Beschreibung
Uracil-DNA Glycosylase excises uracil from dU-containing DNA by cleaving the N-glycosidic bond between the uracil base and the sugar backbone. This cleavage generates alkali sensitive apyrimidinic sites that are blocked from replication by DNA polymerase or prevented from becoming a hybridization site.
- Uracil-DNA Glycosylase entfernt Uracil aus dU-haltiger DNA, indem die N-Glykosidbindung zwischen der Uracil-Basis und der Zuckerstruktur gespalten wird. Diese Spaltung erzeugt alkaliempfindliche apyrimidinische Stellen, die durch DNA-Polymerase von der Replikation ausgeschlossen oder die daran gehindert werden, eine Hybridisierungsstelle zu werden.
- Doppel- sowie einzelsträngige dU-haltige DNAs fungieren als Substrate für Uracil-DNA-Glykosylase, RNA und normale dT-haltige DNA hingegen nicht.
- Uracil-DNA-Glykosylase kann auch dazu verwendet werden, die Klonierungseffizienz von PCR-Produkten mit integrierten dU-haltigen Primern sowie die Effizienz der ortsgerichteten Mutagenese zu erhöhen.
- Die aus Gadus morhua gewonnene Uracil-DNA-Glykosylase weist alle Eigenschaften des von E. coli stammenden Enzyms auf, bietet jedoch noch den zusätzlichen Vorteil, hitzelabil zu sein. Nach 10-minütiger Inkubation bei 50 °C ist es vollständig und irreversibel inaktiviert.
- Das Enzym wird chromatographisch aufgereinigt und auf kontaminierende Endonukleasen und Exonukleasen geprüft.
- 50 mM Tris-HCl (pH-Wert: 7,5), 100 mM NaCl, 0,5 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,1 % Triton X-100, 50 % Glycerin.
- Das Reaktionsgemisch enthält 70 mM Tris-HCl (pH-Wert: 8,0), 10 mM NaCl, 1 mM EDTA, 100 µg/ml BSA, 3H-dUTP-markierte DNA und Uracil-DNA-Glykosylase. Die Inkubation erfolgt bei 37 °C 1 Stunde lang.
- Eine Unit ist die Enzymmenge, die bei 37 °C zur Freisetzung von 1 nmol Uracil aus dU-haltiger DNA innerhalb von 1 Stunde erforderlich ist.
- 1 Unit/µl
- Untersuchung von DNA-Reparatur und Mutationsnachweis
- Erhöhte Klonierungseffizienz von PCR-Produkten
- Erhöhte Effizienz der ortsgerichteten Mutagenese
- Untersuchung von Protein-DNA-Interaktionen
Spezifikation
Spezifikation
| Inhalt und Lagerung | Auf Trockeneis geliefert. Bei -20 °C lagern. |
| Enzym | Glykosylase |
| Kompatibler Puffer | Lagerungspuffer |
| Menge | 100 U |
| Produkttyp | Uracil-DNA Glycosylase |
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
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