Invitrogen™ TrueTag™ Spender-DNA-Kit, RFP

Beschreibung

Das Invitrogen TrueTag DNA-Spenderkit, RFP, bietet eine schnelle Lösung zur Förderung eines hocheffizienten (bis zu 100 % bearbeitete Zellen) Gen-Taggings mit transfektionsfähiger Spender-DNA für Genom-Editierungsexperimente.

Zu den Vorteilen des TrueTag DNA-Spenderkits gehören:

• PCR-Amplifikation in einem Schritt zur Generierung von Spendervorlagen—Kein Klonen erforderlich
• Generieren von transfektionsfähigen DNA-Spendern in Stunden statt Tagen
• Anreichern von bis zu 100 % GFP-markierte Zellen

Das TrueTag Spender-DNA-Kit, RFP, bietet eine vollständige Lösung zur Herstellung eines hochwertigen DNA-Spenders, um Gene mit einem Selektionsmarker und GFP zu kennzeichnen. Es können einfach zwei locus-spezifische Primer bereitgestellt werden, um Homologiearme hinzuzufügen, PCR-Amplifikation und Reinigung für einen transfektionsfähigen Spender in Stunden und nicht in Tagen. Jedes Kit soll Anwendern Folgendes ermöglichen:

• Markieren des Carboxy- (C-) oder Amino- (N-) Terminus Ihres Gens von Interesse
• Auswahl aus Puromycin oder Blasticidin Selektionsmarker—je nachdem, was dem Zellmodell am besten entspricht
• Einfaches Entfernen von Antibiotika-Resistenzmarkern mit Cre/Lox nach der Zellanreicherung

Im Kit enthalten:

• Vier Vorlagen für lineare Spender: N-Terminus/Puromycin-Resistenz, N-Terminus/Blasticidin-Resistenz, C-Terminus/Puromycin-Resistenz, C-Terminus/Blasticidin-Resistenz
• Phusion Flash High-Fidelity PCR Master Mix
• PCR-Reinigungssäulen und -Puffer
• Positivkontrollprimer zur Markierung von humanem Beta-Aktin (ACTB)

Intuitive Software zur schnellen Entwicklung genspezifischer Reagenzien

Zielspezifische Reagenzien für die Genbearbeitung sind für das ordnungsgemäße Knock-in des fluoreszierenden Tags erforderlich. Die webbasierte Software Invitrogen TrueDesign Genome Editor wurde speziell für folgende Aufgaben entwickelt:

• Identifizieren des Zielgen-Transkripts
• Festlegen der Einfügestelle
• Entwurf und einfache Bestellung aller erforderlichen Komponenten

Benötigte Reagenzien sind über TrueDesign Software erhältlich (nicht im Kit enthalten)

• CRISPR Guide RNA oder TALENs, die neben N- oder C-Terminus entwickelt wurden
• Oligos zur PCR-Amplifikation Ihres Spenders und Hinzufügen geeigneter Homologiearme
• Sequenzierungs-Primer für die Beurteilung der CRISPR-Cas9-Spaltungseffizienz
• Verifizierungsprimer zur Validierung des korrekten Einsetzens des TrueTag DNA-Spenders

Auch separat oder als Teil des TrueDesign-Arbeitsablaufs erforderlich und erhältlich

• TrueCut Cas9 Protein v2, TrueCut HiFi Cas9 Protein oder GeneART CRISPR mRNA
• CRISPRMAX Transfektionsreagenz oder MessengerMAX Transfektionsreagenz