Invitrogen™ TrueTag™ Spender-DNA-Kit, RFP-Stamm

Beschreibung

• Eine schnelle Lösung zur Förderung eines hocheffizienten (bis zu 100 % bearbeitete Zellen) Taggings von stillen oder differentiell exprimierten Genen mit transfektionsfähiger Spender-DNA
• Das Kit bietet alles, was für die Herstellung eines hochwertigen DNA-Spenders erforderlich ist, um die Gene mit einem Selektionsmarker und GFP Stamm zu kennzeichnen.
• Es können einfach zwei locus-spezifische Primer bereitgestellt werden, um Homologiearme und PCR-Amplifikation des Spenders hinzuzufügen
• PCR-Amplifikation in einem Schritt zur Generierung von Spendervorlagen—Kein Klonen erforderlich
• Generieren von transfektionsfähigen DNA-Spendern in Stunden statt Tagen
• Sparen Sie bis zu 3 Monate mit einer Anreicherung im Vergleich zur Isolierung und Charakterisierung einzelner Zellen.
• Anreichern von bis zu 100 % RFP Stamm-markierte Zellen

Jedes Kit soll Anwendern Folgendes ermöglichen:

• Anreichern von markierten Zellen, auch wenn das Zielprotein nicht exprimiert wird
• Wahl zwischen einer Fusion oder einem koexprimierten Fluoreszenz-Tag
• Auswahl aus Puromycin oder Blasticidin Selektionsmarker—je nachdem, was dem Zellmodell am besten entspricht
• Einfaches Entfernen von Antibiotika-Resistenzmarkern mit Cre/Lox nach der Zellanreicherung

Im Kit enthalten:

• Vier Vorlagen für lineare Spender: C-Terminus/Puromycin-Resistenz + 2A, C-Terminus/Blasticidin-Resistenz + 2A, C-Terminus/Puromycin-Resistenz, C-Terminus/Blasticidin-Resistenz
• Phusion Flash High-Fidelity PCR Master Mix
• PCR-Reinigungssäulen und -Puffer
• Positivkontrollprimer zur Markierung von humanem sauren Gliafaserprotein (GFAP)

Intuitive Software zur schnellen Entwicklung genspezifischer Reagenzien

Target-spezifische Reagenzien für die Genbearbeitung sind für das ordnungsgemäße Knock-in des fluoreszierenden Tags erforderlich. Die webbasierte Software Invitrogen TrueDesign Genome Editor erledigt die Designarbeit für Sie:

1. Identifizieren des Target-Gen-Transkripts
2. Festlegen der Einfügestelle
3. Entwurf und einfache Bestellung aller erforderlichen Komponenten

Benötigte Reagenzien sind über die TrueDesign Software erhältlich (nicht im Kit enthalten):

• CRISPR Guide RNA oder TALENs, die neben N- oder C-Terminus entwickelt wurden
• Oligos zur PCR-Amplifikation Ihres Spenders und Hinzufügen geeigneter Homologiearme
• Sequenzierungs-Primer für die Beurteilung der CRISPR-Cas9-Spaltungseffizienz
• Verifizierungsprimer zur Validierung des korrekten Einsetzens des TrueTag DNA-Spenders

Auch separat oder als Teil des TrueDesign-Arbeitsablaufs erforderlich und erhältlich:

• TrueCut Cas9 Protein v2, TrueCut HiFi Cas9 Protein oder GeneART CRISPR mRNA
• CRISPRMAX Transfektionsreagenz oder MessengerMAX Transfektionsreagenz