Invitrogen™ TrueTag™ Spender-DNA-Kit, GFP

Das Invitrogen TrueTag DNA-Spenderkit, GFP, bietet eine schnelle Lösung zur Förderung eines hocheffizienten (bis zu 100 % bearbeitete Zellen) Gen-Taggings mit transfektionsfähiger Spender-DNA für Genom-Editierungsexperimente.

Zu den Vorteilen des TrueTag DNA-Spenderkits gehören:
• PCR-Amplifikation in einem Schritt zur Generierung von Spendervorlagen: Kein Klonen erforderlich
• Generieren transfektionsfähiger DNA-Spender in Stunden statt Tagen
• Anreichern von bis zu 100 % GFP-markierter Zellen

Das TrueTag Spender-DNA-Kit, GFP, bietet alles, was Sie für die Herstellung eines hochwertigen DNA-Spenders benötigen, um Ihr Gen mit einem Selektionsmarker und GFP zu kennzeichnen. Es können einfach zwei locus-spezifische Primer bereitgestellt werden, um Homologiearme hinzuzufügen, PCR-Amplifikation und Reinigung für einen transfektionsfähigen Spender in Stunden und nicht in Tagen. Jedes Kit wurde entwickelt, um Ihnen Folgendes zu ermöglichen:
• Markieren des Carboxy- (C-) oder Amino- (N-) Terminus Ihres Gens von Interesse
• Wählen Sie aus Puromycin oder Blasticidin Selektionsmarker—je nachdem, was dem Zellmodell am besten entspricht
• Einfaches Entfernen von Antibiotika-Resistenzmarkern mit Cre/Lox nach der Zellanreicherung

Im Kit enthalten
• Vier Vorlagen für lineare Spender N-Terminus/Puromycin-Resistenz, N-Terminus/Blasticidin-Resistenz, C-Terminus/Puromycin-Resistenz, C-Terminus/Blasticidin-Resistenz
• Phusion Flash High-Fidelity PCR-Master-Mix
• PCR-Reinigungssäulen und -Puffer
• Positivkontrollprimer zur Markierung von humanem Beta-Aktin (ACTB)

Intuitive Software zur schnellen Entwicklung von genspezifischen Reagenzien
zielspezifische Reagenzien für die Genbearbeitung sind für das korrekte Knock-in des fluoreszierenden Tags erforderlich. Die webbasierte Software Invitrogen TrueDesign Genome Editor wurde speziell für folgende Aufgaben entwickelt:
1. Identifizieren Ihres Target-Gen-Transkripts
2. Festlegen Ihrer Einfügestelle
3. Design und einfache Bestellung aller benötigten Komponenten

Benötigte Reagenzien über TrueDesign Software erhältlich (nicht im Kit enthalten)
• CRISPR Guide RNA oder TALENs, die neben N- oder C-Terminus entwickelt wurden
• Oligos zur PCR-Amplifikation Ihres Spenders und Hinzufügen geeigneter Homologiearme
• Sequenzierungs-Primer für die Beurteilung der CRISPR-Cas9-Spaltungseffizienz
• Verifizierungsprimer zur Validierung des korrekten Einfügens des TrueTag DNA-Spenders

Auch separat oder als Teil des TrueDesign-Arbeitsablaufs erforderlich und erhältlich:
• TrueCut Cas9 Protein v2, TrueCut HiFi Cas9 Protein oder GeneART CRISPR mRNA
• CRISPRMAX Transfektionsreagenz oder MessengerMAX Transfektionsreagenz