Thermo Scientific™ Phusion U Hot Start PCR Master Mix

Thermo Scientific Phusion U DNA-Polymerase ist ein neuartiges, speziell entwickeltes High-Fidelity-Enzym, das mithilfe der Fusionstechnologie entwickelt wurde. Durch eine proprietäre Mutation in der sogenannten dUTP-Bindungstasche von Phusion überwindet Phusion U eine wichtige Einschränkung von Proofreading-Enzymen, denn es ist in der Lage, dUTP zu integrieren und Uracil in DNA-Templates durchzulesen.
Neben der Uracilanwendung bietet Phusion U selbstverständlich alle Eigenschaften anderer Phusion DNA-Polymerasen wie hohe Genauigkeit, Geschwindigkeit, Fähigkeit zur Amplifikation langer Amplikone bis zu 20 kb und eine hohe Spezifität mit auf Affibody basiertem Heißstart. Diese Merkmale machen die Phusion U Hot Start DNA-Polymerase zu einer hervorragenden Wahl für wichtige Anwendungen wie die Amplifikation von Bisulphit-umgewandelter oder beschädigter DNA sowie die Verwendung der Kontrolle der Verschleppungskontamination.
Phusion U Hot Start DNA-Polymerase ist auch in den Formaten Master Mix und Green erhältlich. Phusion U Hot Start PCR-Mastermix ist eine praktische 2x Mischung, die die Anzahl der Pipettierschritte minimiert. Der Anwender muss lediglich das Template und die Primer zugeben. Das Phusion U Green-Format ist eine Kombination aus Phusion U Hot-Start DNA-Polymerase und 5X Phusion Green-Puffer. Die Puffer enthalten ein Dichtereagenz und zwei Tracking-Farbstoffe zum direkten Auftragen von PCR-Produkten auf ein Gel. Der Farbpuffer inhibiert die Phusion U nicht und ist mit Downstream-Anwendungen wie DNA-Sequenzierung, Ligation und Restriktionsverdau kompatibel.
Besonderheiten
•Genauigkeit – extrem hohe Wiedergabetreue DNA-Polymerase (25x Taq)
•Uracil-Toleranz – entwickelt zur Integration von dUTP und zur Verstärkung von Uracil enthaltenden Templates
•Spezifität – Heißstart für weniger unspezifische Amplifikation und Primer-Abbau.
•Geschwindigkeit – kurze Extensionszeiten (15 bis 30 s/kb)
• direktes Laden von PCR-Produkten auf Gele
Anwendungen
• Amplifikation von Bisulfit-konvertierter DNA
• Amplifikation geschädigter oder alter DNA
• Kontrolle gegen Verschleppen von Kontamination
• Uracil-Exzision-basierte (USER) Klonierungsmethoden
Enthält
Phusion U Hot-Start DNA-Polymerase (F-555)
• Phusion U Hot-Start DNA-Polymerase, 2 E/μL
• 5X Phusion HF-Puffer
• 5X Phusion GC-Puffer
• DMSO
Sowohl der Phusion HF-Puffer als auch der Phusion GC-Puffer ergeben 1,5 mM MgCl₂ in der endgültigen 1X Konzentration.
Phusion U Green Hot-Start DNA-Polymerase (F-556)
• Phusion U Hot-Start DNA-Polymerase, 2 E/μl
• 5X Phusion Green HF-Puffer
• 5X Phusion Green GC-Puffer
• DMSO
Sowohl der Phusion Green HF-Puffer als auch der Phusion Green GC-Puffer ergeben 1,5 mM MgCl₂ in der endgültigen 1X Konzentration.
Phusion U Hot-Start PCR Master Mix
• 2X Phusion U PCR Master Mix (Phusion U Hot-Start DNA-Polymerase, 2X Reaktionspuffer, 3 mM MgCl₂, 400 μM von jedem dATP, dTTP, dCTP und dGTP)
• Wasser, nukleasefrei

Gefahren: Keine
> Lagerpuffer: 20 mM Tris-HCl (pH 7,4 bei 25 °C), 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 100 mM KCl, Stabilisatoren und 50 % Glycerin.
> Lagerungsbedingungen: -20 °C