Thermo Scientific™ CpG Methylated Jurkat Genomic DNA

Genomische DNA wurde aus Jurkat E6.1-Zellen (humane akute T-Zellleukämie, Klon E6.1) isoliert, die in mit 10 % fötalem Kälberserum ergänzten RPMI-Medien zu Konfluenz gewachsen sind. Die isolierte genomische DNA wurde mit CpG-Methyltransferase behandelt, erneut aufgereinigt und im TE-Puffer gelöst. Der CpG-Methylierungsgrad von ≥ 98 % wurde durch Bisulfit-Sequenzierung bestätigt.

Thermo Scientific CpG Methylierte Jurkat Genom-DNA ist humane männliche genomische DNA aus Jurkat-Zellen, die enzymatisch mit CpG Methyltransferase (M.SssI) methyliert wurde. Genomische DNA wurde aus Jurkat-Zellen (humane akute T-Zellen-Leukämie) isoliert, die in mit 10 % fötalem Kälberserum ergänzten RPMI-Medien zu Konfluenz gewachsen sind. Die isolierte genomische DNA wurde mit CpG-Methyltransferase behandelt, erneut aufgereinigt und im TE-Puffer gelöst. Der Grad der CpG-Methylierung von ≥ 98 % wurde durch Bisulfit-Sequenzierung bestätigt.

Vorteile

• Rein – DNA frei von Inhibitoren, Proteinen und RNA
• Praktisch – Gebrauchsfertige Konzentration von 100 ng/μl
• Kompatibel mit nachgeschalteten Anwendungen
• Vollständige Methylierung von Zytosinen in CpG-Dinukleotiden
  Anwendungen
• Als Kontrollen im Folgenden:
• Bisulfit-Sequenzierung
• Kombinierte Bisulfit-Restriktionsanalyse (COBRA)
• Methylation-sensitive Single-Nucleotide Primer Extension (Ms-SNuPE)

A260/230-Verhältnis: ≥ 2
A260/280-Verhältnis: 1,75 bis 1,98
Gefährlich: Nein
Qualitätskontrolle:

• Während der Agarose-Gelelektrophorese wird ein vorherrschendes Band > 30 kb beobachtet. Die DNA-Konzentration wird spektrophotometrisch bestimmt. Anhand von Tests mit markierten Oligonukleotiden wird das Fehlen von Nukleasen bestätigt.
• Anhand einer qPCR-Analyse wird bestätigt, dass die CpG-methylierte DNA HpaII vor dem Verdau durch das methylierungssensitive Restriktionsenzym geschützt wurde. Nach der qPCR werden äquivalente Cq-Werte für HpaII-verdaute und nicht verdaute Kontroll-DNA beobachtet.
• Die DNA-Reinheit wird durch einen funktionellen qPCR-Test bestätigt, bei dem die Cq-Werte der MspI- und HpaII-verdauten Template-DNA um ≥ 5 Zyklen voneinander abweichen müssen.
• Anhand von PCR wird das Fehlen von Mykoplasma-DNA bestätigt.

Als Kontrollen bei der Bisulfit-Sequenzierung, der Combined Bisulphite Restriction Analysis (COBRA), der Methylation-sensitive Single-Nucleotide Primer Extension (Ms-SNuPE)