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Beschreibung
Katalysiert die Bildung einer Phosphodiesterbindung zwischen nebeneinanderliegenden 5‘-Phosphat- und 3‘-Hydroxy-Enden in Doppelstrang-DNA oder -RNA mit der Thermo Scientific™ T4 DNA-Ligase. Das Enzym repariert einsträngige Einbrüche (sog. Nicks) in Duplex-DNA und -RNA oder DNA/RNA-Hybriden. Es verbindet darüber hinaus DNA-Fragmente mit Sticky- oder Blunt-Kettenenden, übt aber auf einsträngige Nukleinsäuren keine Aktivität aus.
Die T4 DNA Ligase erfordert ATP als Kofaktor.
Highlights
- Aktiv in Thermo Scientific Restriktionsenzym, PCR und RT-Puffern (bei Lieferung mit ATP)
- Schnell – Die Sticky-End-Ligation ist innerhalb von 10 Minuten bei Raumtemperatur abgeschlossen.
- Im Lieferumfang enthalten: PEG-Lösung für effiziente Blunt-End-Ligationen
Anwendungen
- Klonen von DNA-Fragmenten, die aus Restriktionsenzymen erzeugt wurden
- Klonen von PCR-Produkten
- Verschmelzen doppelsträngiger Oligonukleotid-Linker bzw. -Adaptoren mit DNA
- Ortsspezifische Mutagenese
- Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP, Verfahren zur Herstellung eines genetischen Fingerabdrucks)
- Ligase-vermittelter RNA-Nachweis (siehe Referenz 3)
- Nick-Reparatur in Duplex-DNA, RNA oder DNA/RNA-Hybriden
- Selbstzirkulation linearer DNA.
Hinweise
- Die Bindung von T4 DNA Ligase an DNA kann zu einer Verschiebung der Bande im Agarosegel führen. Um dies zu vermeiden, die Proben mit 6X DNA-Ladefarbstoff & SDS-Lösung 5 Minuten lang bei 70°C oder 10 Minuten lang bei 65°C inkubieren und dann vor der Elektrophorese auf Eis kühlen.
- Bei der Transformation darf das Volumen des Ligationsreaktionsgemischs das Volumen der kompetenten Zellen nicht um mehr als 10 % überschreiten.
- Vor der Elektrotransformation muss die T4 DNA Ligase durch Zentrifugationssäule oder Chloroform-Extraktion aus dem Ligasegemisch entfernt werden. Die extrahierte DNA kann noch weiter mit Ethanol ausgefällt werden.
Spezifikation
Spezifikation
| Konzentration | 5 U/μl |
| Enzym | DNA-Ligase |
| Kompatibler Puffer | 10x T4-DNA-Ligasepuffer |
| Menge | 1000 E |
| Produkttyp | T4 DNA-Ligase |
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
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