Invitrogen™ SuperScript™ IV Reverse Transkriptase

SuperScript™ IV reverse Transkriptase (RT) deutlich verbesserte Eigenschaften im Vergleich zu SuperScript III in Bezug auf Hemmstoffresistenz, Prozessivität und Reaktionsgeschwindigkeit, bei Beibehaltung aller Vorteile des früheren Enzyms, einschließlich erhöhter Thermostabilität, hocheffizienter Synthese von cDNA in voller Länge und reduzierter RNase-Aktivität. SuperScript IV RT sorgt für eine zuverlässige, gleichbleibende und schnelle cDNA-Synthese in Gegenwart von Inhibitoren, die in einer Vielzahl von Proben dazu führen, dass andere aktuell verfügbare RTs nur ineffizient agieren.

SuperScript IV RT ist die erste Wahl für alle RT-PCR- und qRT-PCR-Anwendungen in der SuperScript-Produktfamilie. Der Einsatz ist insbesondere dann empfehlenswert, wenn Reproduzierbarkeit und Zuverlässigkeit der Ergebnisse von entscheidender Bedeutung sind, und wenn Hemmstoffe in der RNA-Probe die cDNA-Synthese stören und zu Verzerrungen in Genexpressionsstudien führen könnten.

Die Merkmale von SuperScript IV Reverse Transcriptase beinhalten:

• Deutlich verbesserte Resistenz gegen eine Vielzahl von Inhibitoren, die die cDNA-Synthese beeinträchtigen können
• Robuste und spezifische cDNA-Synthese für ein breites Spektrum von Probentypen
• Eine schnellere Reverse-Transkriptase-Reaktion, deren Inkubationszeit von > 50 Min. auf 10 Min. reduziert wird
• Deutlich gesteigerte Prozessivität im Vergleich zu SuperScript III RT

Quelle
Gewonnen durch Expression des pol-Gens von M-MLV in E. coli und für eine erhöhte Thermostabilität und Halbwertszeit, Prozessivität, Hemmstoffresistenz sowie reduzierte RNase-H-Aktivität modifiziert.

Leistungs- und Qualitätskontrolle
Endodeoxyribonuklease-, Exodeoxyribonuklease- und Ribonuklease-Assays sowie Ausbeute und Länge des cDNA-Produkts.

Einheiten-Definition
Eine Einheit von SuperScript IV RT entspricht der Enzymmenge, die benötigt wird, um 1 nmol Desoxyribonukleotid in säurefällbares Material einzubauen, und zwar in 10 Min. bei 37 °C mit Poly(A) oligo(dT)12-18 als Template/Primer.

Einheiten-Reaktionsbedingungen
50 mM Tris-HCl (pH 8,3), 4 mM MgCl2, 10 mM DTT, 50 mM KCl, 0,5 mM dTTP, 0,4 MBq/ml [3H]-dTTP, 0,4 mM poly(A) oligo (dT)12-18 und Enzym in 20 μl für 10 Min. bei 37 °C.