Invitrogen™ SuperScript™ IV System für Erststrangsynthese

• Kit enthält Superscript IV Reverse Transkriptase (RT), einen firmeneigenen MMLV-Mutanten mit robuster und zuverlässiger cDNA-Synthese in RT-Reaktionen, und ezDNase zum Entfernen potenzieller genomischer DNA-Kontamination.
• Das System wurde gegenüber dem SuperScript III-basierten System im Hinblick auf Hemmstoff-Resistenz, Aktivität und Reaktionsgeschwindigkeit deutlich verbessert, wobei gleichzeitig alle Vorteile des Vorgängersystems erhalten blieben, einschließlich erhöhter Thermostabilität, hocheffizienter Volllängen-cDNA-Synthese und reduzierter RNase-Aktivität.
• Sorgt für eine zuverlässige, gleichbleibende und schnelle cDNA-Synthese in Gegenwart von Inhibitoren, die in einer Vielzahl von Proben dazu führen, dass andere aktuell verfügbare RTs nur ineffizient agieren.
• Enthält alle erforderlichen Komponenten für eine RT-Reaktion, ein zusätzliches Kontrollgen und Primer, und ermöglicht die flexible Anpassung des Verfahrens.
• EzDNase zum Entfernen genomischer DNA ist enthalten.
• Das vereinfachte Entfernen genomischer DNA verkürzt das gesamte Reverse-Transkriptionsprotokoll drastisch und reduziert mögliche Abweichungen bei der Genexpression aufgrund von RNA-Verlusten oder -Schäden während der konventionellen DNase-Behandlung.
• Ist ideal, wenn Reproduzierbarkeit und Zuverlässigkeit der Ergebnisse von entscheidender Bedeutung sind, und wenn Hemmstoffe in der RNA-Probe die cDNA-Synthese stören und zu Verzerrungen in Genexpressionsstudien führen könnten.
• Verbesserte Resistenz gegen eine Vielzahl von Inhibitoren, die die cDNA-Synthese beeinträchtigen können
• Robuste und spezifische cDNA-Synthese für ein breites Spektrum von Probentypen
• Schnellere reverse Transkriptase-Reaktion, welche die Inkubationszeit von > 50 min auf 15 min reduziert, mit einfachem Verfahren zum Entfernen von genomischer DNA

Enzymquelle
Gewonnen durch Expression des pol-Gens von M-MLV in E. coli und für eine erhöhte Thermostabilität, Halbwertszeit, Prozessivität und Inhibitorresistenz sowie reduzierte RNase H-Aktivität modifiziert.

Wirkungs- und Qualitätskontrolle
Endodesoxyribonuklease-, Exodesoxyribonuklease- und Ribonuklease-Assays sowie Ausbeute und Länge des cDNA-Produkts.

Definition einer Einheit
Eine Einheit von SuperScript IV RT entspricht der Enzymmenge, die benötigt wird, um in 10 min bei 37 °C mit Poly(A)-Oligo(dT)_12 – 18 als Template/Primer 1 nmol Desoxyribonukleotid in säurefällbares Material einzubauen.

Reaktionsbedingungen der Einheit
50 mM Tris-HCl (pH 8,3), 4 mM MgCl², 10 mM DTT, 50 mM KCl, 0,5 mM dTTP, 0,4 MBq/ml [³H]-dTTP, 0,4 mM Poly(A)-Oligo(dT)_12 – 18 und Enzym in 20 μl für 10 min bei 37 °C