Thermo Scientific™ SILAC Protein Quantitation Kit (LysC), RPMI 1640

Thermo Scientific SILAC-Proteinquantifizierungskit – RPMI 1640 wird für die spezifische Analyse der Proteinexpression mittels Massenspektrometrie verwendet, bei der stabile Isotope in Zellkultur durch Aminosäuren markiert werden (SILAC).

Stable Isotope Labeling with Amino Acids in Cell Culture (SILAC) ist eine leistungsstarke Methode zur Identifizierung und Quantifizierung relativer unterschiedlicher Veränderungen in komplexen Proteinproben. Dieser Ansatz umfasst die metabolische In-vivo-Integration von „schweren“ 13C- oder 15N-markierten Aminosäuren in Proteine, gefolgt von der Massenspektrometrie (MS) zur beschleunigten und umfassenden Identifizierung, Charakterisierung und Quantifizierung von Proteinen.

Da Peptide, die mit schweren und leichten Aminosäuren gekennzeichnet sind, chemisch identisch sind, koeluieren sie während der Umkehrphasensäulen-Vorfraktionierung und werden daher während der MS-Analyse gleichzeitig erkannt. Die durchschnittliche Änderung der Proteinreichweite in der behandelten Probe wird dann mithilfe relativer Peak-Intensitäten mehrerer isotopisch verschiedener Peptide aus jedem Protein bestimmt.

Jedes Kit enthält alle erforderlichen Reagenzien für isotopisch markierte Zellen mit 13C6-L-Lysin-2HCl, einschließlich Medien, schweren und leichten Aminosäuren und dialysiertem Serum. Schwere L-Arginin-HCl-Derivate (Artikel-Nr. 88210, 89990) sind gesondert erhältlich und lassen sich mit Pierce SILAC-Kits zur Proteinquantifizierung kombinieren, um die Abdeckung von Peptid-Isotopen-Markierungen zu verbessern. Kits sind kompatibel mit Säugetierzelllinien, die für das Wachstum in DMEM- bzw. RPMI-1640-Medien angepasst sind. Kits mit speziellen Medienzusammensetzungen sind auch für humane und murine Stammzelllinien erhältlich. In Kombination mit Thermo Scientific Protein-/Peptid-Probenanreicherungsprodukten ermöglichen Pierce SILAC-Kits zur Proteinquantifizierung auch die MS-Analyse von Proteinen mit geringer Konzentration wie Zelloberflächenproteinen, organellspezifischen Proteinen und post-translationalen Proteinmodifikationen wie Phosphorylierung oder Glykosylierung.

Empfohlen für: Quantitative Analyse relativer Veränderungen der Proteinreichweite bei verschiedenen Zellbehandlungen; Quantitative Analyse von Proteinen, für die keine Antikörper verfügbar sind; Profiling der Proteinexpression normaler im Vgl. zu erkrankten Zellen; Identifizierung und Quantifizierung Hunderter bis Tausender Proteine in einem einzigen Experiment

• Effizient – 100%iger Markierungseinbau in Proteine lebender Zellen
• Reproduzierbar—Eliminiert die durch differenzielle Probenvorbereitung verursachte intraexperimentelle Variabilität
• Flexibel—Medien, die sowohl in L-Lysin als auch in L-Arginin mangelhaft sind, ermöglichen durch die Markierung zweier Aminosäure-Isotopen eine vollständigere Proteomabdeckung
• Kompatibel – Markierung von Proteinen, die in einer Vielzahl von Säugetierzelllinien exprimiert werden, die für das Wachstum im RPMI 1640 Medium angepasst sind, einschließlich HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat und anderen
• Hochwertige Supplemente – schwere Aminosäuren mit > 99 % Isotopenreinheit; dialysiertes FKS, das getestet ist, um sicherzustellen, dass es steril, Endotoxin-frei und zellkulturkompatibel ist