Macherey-Nagel™ RNA-Isolierung, RA1 Lysepuffer, Macherey-Nagel™

Zellen werden durch Inkubation in einer Lösung mit chaotropen Ionen lysiert. Dieser Lysepuffer inaktiviert RNasen, was geeignete Bindungsbedingungen schafft, die die Adsorption von RNA an die Silikamembran begünstigen. Nach der Lyse werden Homogenisierung und Viskositätsreduktion durch Filtration mit NucleoSpin™ Filtereinheiten erreicht. An die Membran gebundene kontaminierende DNA wird durch eine DNase I-Lösung beseitigt, die während der Vorbereitung direkt auf die Membran aufgebracht wird. Optimale Bedingungen für DNase werden erreicht, indem die Membran vor der Behandlung mit einem spezifischen Entsalzungspuffer gewaschen wird. Salze, Metaboliten und makromolekulare zelluläre Komponenten werden durch einfaches Waschen mit zwei verschiedenen Puffern entfernt. Die Gesamt-RNA wird schließlich mit RNase-freiem Wasser eluiert. Das NucleoSpin™ RNA Plant Kit enthält zwei alternative Lysepuffer: In den meisten Fällen wird die aufgrund seiner starken Denaturierungseigenschaften Puffer RA1 für die Lyse empfohlen. Das Vorhandensein abnormer Metaboliten in einer Vielzahl von pflanzlichen Geweben oder Pilzen kann Lysatverfestigung verursachen, was zu einer nicht weiterverarbeitbarer Aufschlämmung führt. In solchen Fällen ist RAP der alternative Puffer der Wahl. Zur gründlichen Homogenisierung und Reduzierung der Lysat-Viskosität sind auch NucleoSpin™ Filtereinheiten lieferbar. Inhalt des Kits: NucleoSpin™ RNA-Säulen mit 2-ml-Auffangröhrchen, 2-ml-Sammelröhrchen, 1.5-ml-Mikrozentrifugenröhrchen, NucleoSpin™ Filtern, Puffern, RNase-freier DNase I, DNase I Reaktionspuffer, RNase-freiem Wasser.

• Silika-Membran-Technologie
• Ertrag: 3 μg bis 70 μg aus 100 μg Pflanzenmaterial
• Probenmaterial: 1 mg bis 100 mg Gewebe
• Elutionsvolumen: 60 μ l
• Fragmentgröße: 200 bp bis 20 kb
• Bindungsvermögen: 200 μ g
• Vorbereitungszeit: 30min/6 Preps
• Format: Mini-Spin-Säule
• DNase I im Lieferumfang
• NucleoSpin Filtersäulen für die Homogenisierung von Lysat und die Viskositätsreduzierung im Lieferumfang enthalten
• Parallele Aufreinigung von DNA mit dem NucleoSpin RNA/DNA-Pufferset NucleoSpin™ RNA Plant ist für die Isolierung von DNA-freier, qualitativ hochwertiger RNA aus einer Vielzahl von Pflanzen- und Pilzproben konzipiert.