Invitrogen™ ProLong™ Glass Eindeckmittel

ProLong Glass Antifade Mountant ist ein hart abbindendes, gebrauchsfertiges Eindeckmittel auf Glycerin-Basis, das direkt auf die fluoroszenzmarkierten Zellen oder Gewebeproben auf dem Mikroskopobjektträger oder Deckglas appliziert wird. Es wird ohne DNA-Färbemittel oder mit dem blauen DNA-Färbemittel NucBlue (Hoechst 33342) oder mit dem tiefroten DNA-Färbemittel SYTOX Deep Red formuliert. Das ProLong Glass Eindeckmittel hat einen Brechungsindex von 1,52 nach dem Aushärten, ähnlich dem von Glas-Deckgläsern, kompatiblem Immersionsöl und Ölimmersions-Mikroskopoptiken, was eine überragende Auflösung und Empfindlichkeit ermöglicht. Das ProLong Glass Eindeckmittel wurde außerdem entwickelt, um einen beispiellosen Photobleich-Schutz über die sichtbaren und Nahinfrarotspektren zu bieten. Sie können das ProLong Glass Antifade Eindeckmittel mit nahezu jedem fluoreszierenden Farbstoff oder fluoreszierendem Protein (z. B. GFP, RFP, mCherry) und mit jedem Zell-/Gewebetyp verwenden, um Bildtiefen von 0 bis 100 µm für helle, hochauflösende Z-Stapel-, 3D- und 2D-Bilder zu erhalten. Für ein nicht- aushärtendes Eindeckmittel mit einem Brechungsindex von 1,52 kann SlowFade Glass Soft-Set Antifade Eindeckmittel verwendet werden.

Mit seinem hohen Brechungsindex von 1,52 und der überlegenen Antifade-Formulierung bietet das ProLong Glass Antifade Eindeckmittel folgende Vorteile:
• Bis zu 75 % verbesserte axiale Auflösung für scharfe Bilder
• 3–4-mal höhere Bildschärfe im Vergleich zu Deckflüssigkeiten mit einem Brechungsindex von 1,47, mit scharfen Bildern für Zelleinzelschichten, Gewebeschnitte oder 3D-Zellkulturen mit einer Dicke/Brenntiefe von bis zu 150 μm
• Geringer Hintergrund über das Spektrum
• Aufrechterhaltung der Signale von der gehemmten Photobleichung
• Wochen- bis monatelange Stabilität der Objektträgerproben
• Einfache Anwendung
• Erhältlich mit oder ohne DAPI

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ProLong Glass Hard Set-Eindeckmittel ist vorgemischt und gebrauchsfertig in einer Tropfflasche oder 10 ml-Flasche mit oder ohne DNA-Färbemittel erhältlich. NucBlue (Hoechst 33342) wird nach Bindung an DNA durch UV-Licht bei 360 nm angeregt, mit einem Emissionsmaximum von 460 nm, und mit einem herkömmlichen DAPI-Filter nachgewiesen. Das SYTOX Deep Red Färbemittel wird nach Bindung an DNA durch rotes Licht bei 660 nm angeregt, mit einem Emissionsmaximum bei 682 nm, und mit einem herkömmlichen Cy5/Tiefrot-Filter nachgewiesen. Nach dem Entfernen von überschüssigem Wasser, einfach der Probe einen Tropfen Deckflüssigkeit hinzugeben, Deckglas aufsetzen, aushärten lassen und das Bild aufnehmen. ProLong Glass Deckflüssigkeit ist eine harte abbindende, aushärtende Deckflüssigkeit, die die optische Refraktion und sphärische Aberration im optischen Pfad minimiert, eine längerfristige Lagerung Ihrer Proben ermöglicht und sie vor Photobleichung schützt. Dase ProLong Glass Eindeckmittel verfärbt oder schrumpft beim Aushärten nicht. Dadurch können qualitativ hochwertige Fluoreszenzbilder Wochen oder sogar Monate nach dem Einlegen der Objektträger aufgenommen werden.

Das ProLong Glass Antifade Eindeckmittel mit NucBlue Färbemittel enthält eine optimierte Konzentration des Hoechst 33342-Färbemittels, das eine erstklassige nukleare Markierung der meisten Zellen und Gewebe ermöglicht. Das ProLong Glass Eindeckmittel mit NucBlue Färbemittel wird für Proben mit einer Dicke über 30 µm nicht empfohlen. Dickere Proben können längere Inkubationen mit Markierungsreagenzien erfordern, daher wird eine Vorinkubation mit NucBlue Live ReadyProbes Reagenz empfohlen.

Bilder mit maximaler Helligkeit und Schärfe
Studien zeigen, dass die axiale Auflösung eines Mikroskopie-Systems durch Anpassung des Brechungsindex des Trägermediums verbessert werden kann, wodurch die Lichtsammlung des Objektivs maximiert wird (1 bis 3). Fouquet et al. konnten eine drastische Verbesserung der axialen Auflösung durch Verwendung eines Konfokalmikroskops mit Medien mit hohem Brechungsindex nachweisen (3). Vergleicht man das ProLong Glass Eindeckmittel, das einen Brechungsindex von 1,52 hat, mit einem Befestigungsmedium mit einem Brechungsindex von 1,47, so verbessert sich die axiale Auflösung bei einer Brenntiefe von 40 µm um 32 % und bei einer Brenntiefe von 100 µm um 75 % (siehe Abbildung unten). Die Signalintensität und Empfindlichkeit von Fluorophoren wird ebenfalls verbessert, wenn die Schärfentiefe innerhalb der Probe zunimmt. Die gleiche oder stärkere Verbesserung der Auflösung und Empfindlichkeit ist in lateraler Richtung erkennbar. Dadurch ist ProLong Glass ein hervorragendes Eindeckmittel für die Erfassung von Z-Stack-, 3D- und 2D-Bildern von Zellen und Gewebe in Tiefen von 0 bis 100 µm (siehe Abbildung unten).

Hemmen Sie Photobleichung über die sichtbaren und Nah-IR-Spektren.
Egal, welche fluoreszierenden Farbstoffe oder fluoreszierenden Proteine Sie verwenden, ProLong Glass Eindeckmittel bietet hervorragenden Schutz vor Photobleichung. Es hat sich gezeigt, dass es mit einer breiten Palette von Fluoreszenzfarbstoffen, einschließlich Alexa Fluor, FITC, TRTC, Texas Red, Cy3 und Cy5 Farbstoffen (siehe Abbildung unten) eine erstklassige Leistung bietet. ProLong Glass Eindeckmittel löscht keine Fluorophore, und seine Fähigkeit, eine helleres Signal ohne Hintergrund zu liefern, hilft sicherzustellen, dass Sie hochauflösende Bilder bester Qualität für die Veröffentlichung erhalten.

Stabile Signale während der Bildgebung und für die längerfristige Lagerung
ProLong Glass Eindeckmittel ist ideal für die Archivierung von Proben mit fluoreszierenden Farbstoffen oder fluoreszierenden Proteinen und für die Erhaltung der Signalstärke während längerer Bildgebungszeiten, wie wiederholtes Scannen unter konfokaler Laserscannerbeleuchtung oder mit Superauflösungsmikroskopie. Und es ist einfach zu verwenden— Überschüssiges Wasser aus der gefärbten Probe und der Halterung lässt sich leicht entfernen.

Hervorragende Brechungsindexanpassung für scharfe Bilder
Für moderne hochauflösende Bildgebungsanwendungen ist die Brechungsindexanpassung von entscheidender Bedeutung. Das ProLong Glass Eindeckmittel härtet auf einen Brechungsindex von 1,52 aus. Darüber hinaus macht diese Aushärtungseigenschaft die Verwendung von unvorteilhaften Acrylharzen (z. B. Fingernagellack) überflüssig, die moderne Mikroskopobjektive beschädigen oder zerstören können.

Literaturhinweise
1: Cremer C, Masters BR. Resolution enhancement techniques in microscopy. Eur Phys J. 2013 38(3):281-344.
2: Shimi T, Kittisopikul M, Tran J, Goldman AE, Adam SA, Zheng Y, Jaqaman K, Goldman RD. Structural organization of nuclear lamins A, C, B1, and B2 revealed by superresolution microscopy. Mol Biol Cell. 2015 26(22):4075-86.
3: Fouquet C, Gilles JF, Heck N, Dos Santos M, Schwartzmann R, Cannaya V, Morel MP, Davidson RS, Trembleau A, Bolte S. Improving axial resolution in confocal microscopy with new high refractive index mounting media. PLoS One. 2015 10(3):e0121096.