Thermo Scientific™ Pierce™ Quantitative Peptide Assays & Standards

• Empfindlich:—Exakter Nachweis von nur 5 µg/ml (fluorometrisch) bzw. 25 µg/ml (kolorimetrisch) Peptidmischung
• Reproduzierbar:—Assayleistung wurde mit Peptidverdaugemischen stringent getestet
• Robuster Peptidverdausandard:—Das Kit enthält einen validierten Peptidverdaustandard für verbesserte Reproduzierbarkeit der Quantifizierung
• Kompatibel:—Funktioniert mit vielen Reagenzien, darunter Reagenzien für die MS-Probenvorbereitung und TMT-markierte Peptide (fluorometrischer Assay)
• Praktisch:—Einfaches Format zum Mischen und Ablesen mit stabilem Signal, das in nur 5 Minuten (fluorometrisch) bzw. 15 Minuten (kolorimetrisch) abgelesen werden kann

Pierce quantitativer kolorimetrischer Peptid-Assay bietet modifizierte BCA-Reagenzien für die Reduktion von Cu+2 zu +1 Cu, einen für die Quantifizierung von Peptidmischungen optimierten proprietären Chelator und einen Peptidverdau-Referenzstandard zur Erzeugung linearer Standardkennlinien. Dieser kolorimetrische Peptidassay erfordert eine geringe Menge an Probe (20 µl) und hat einen Arbeitsbereich von 25 – 1.000 μg/ml Peptidkonzentration. Bei der Reaktion wird das Kupfer zunächst durch das Amid-Backbone der Peptide unter alkalischen Bedingungen reduziert (Biuretreaktion), gefolgt von der Chelator-Kopplung mit reduziertem Kupfer zu einem leuchtend roten Komplex (bei 480 nm absorbiert), der in nur 15 Minuten abgelesen werden kann. Das aus dieser Reaktion erzeugte Signal ist 3–4-fach empfindlicher als der Micro-BCA Protein-Assay für Peptidanalysen. Der kolorimetrische Peptid-Assay ist mit TMT-markierten Peptiden kompatibel, wird jedoch nicht für synthetische Peptide empfohlen, da der Assay durch den Gehalt an Peptidaminosäuren beeinflusst wird.

Zu den Reagenzien des Pierce quantitativen Fluoreszenz-Peptidassays gehören Peptidassaypuffer, ein fluoreszierendes Peptidmarkierungsreagenz und ein Peptid-Verdauassaystandard für die quantitative Messung von Peptidkonzentrationen. Dieser empfindliche Assay erfordert nur 10 µl Probe, erzeugt eine lineare Reaktion mit aufsteigenden Peptidkonzentrationen (5–1.000 μg/ml) und liefert Ergebnisse in einer stabilen endgültigen Fluoreszenz, die in nur fünf Minuten nachweisbar ist. In diesem Assay werden Peptide mithilfe eines aminreaktiven fluoreszierenden Reagenz, das bis zur Reaktion mit tryptischen Peptiden nicht fluoreszierend ist, spezifisch am Aminoterminus markiert. Die fluoreszierend markierten Peptide werden auf einem Mikrotiterplatten-Lesegerät (Anr. 390/Em. 475) nachgewiesen. Dieser Assay eignet sich für die quantitative Messung von Peptidverdaugemischen und synthetischen Peptiden mit einem unblockierten Aminoterminus. Fluoreszenzassays sind nicht mit TMT-markierten Peptiden kompatibel.

Der Thermo Scientific Peptidverdau-Assaystandard wurde als Referenzstandard zur Verwendung mit Pierce quantitativen fluorometrischen und kolorimetrischen Peptid-Assays entwickelt und soll die Reproduzierbarkeit und Genauigkeit der Peptidquantifizierung verbessern. Der Peptidverdau-Assaystandard wird in gebrauchsfertiger flüssiger Form mit 1 mg/ml geliefert. Das Referenzprotein wurde mit MS-Grad-Trypsin verdaut, um fehlende Spaltungen zu minimieren. Um eine konsistente, chargenübergreifende Leistung zu gewährleisten, wird die Verdauseffizienz des Proteins überwacht. Die Qualität wird im Vergleich zu einem Referenzstandard bewertet.

Anwendungen
• Normalisierende Probenkonzentrationen für nachgelagerte Quantifizierungsanwendungen
• Normalisierende Probenladevolumen für LC-, MS- und LC/MS-Anwendungen
• Messung der Rückgewinnung nach Peptidaufreinigungsverfahren