Thermo Scientific™ Pierce™ Monomeric Avidin UltraLink™ Resin

Pierce Monomeric Avidin Kit und Harze stellen eine einzigartige Lösung unter den Biotin-bindenden Trägern dar, da sie die nicht denaturierende Affinitätsreinigung biotinylierter Moleküle gestatten. Das immobilisierte, monomere Avidin bindet Biotin mit hoher Spezifität und moderater Affinität. Auf diese Weise ist es möglich, erst die nicht biotinylierten Moleküle durch Wäsche zu entfernen und anschließend die Biotin-markierten Moleküle mit 2 mM Biotin in Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS) kompetitiv zu eluieren. Diese Technik bietet die schonendsten Elutionsbedingungen für die Reinigung von biotinylierten Proteinen und vermeidet die Kontamination und andere Probleme, die mit herkömmlichen Avidin- und Streptavidin-Methoden verbunden sind. Die Säule mit monomerem Avidin kann anschließend mit 0,1 M Glycin regeneriert werden, um die gebundenen Biotinreste abzulösen, ohne die Fähigkeit zu verlieren, eine weitere biotinylierte Probe zu binden.

Bei typischem Avidin oder Streptavidin ist die Biotin-Bindungsaffinität (Kd = 10^–15 M) so groß, dass die Reinigung mit diesen klassischen Medien denaturierende Elutionsbedingungen erfordert, z. B. den Rückgriff auf 8 M-Guanidin·HCl mit pH 1,5 oder Kochen in reduzierendem SDS-PAGE-Probenladepuffer. Neben den unerwünschten Wirkungen dieser Mittel auf die interessierenden biotinylierten Proteine verursachen solche aggressiven Elutionsbedingungen in der Regel Verunreinigungen, denn unerwünschte Proteine (wie z. B. Avidin- oder Streptavidin-Untereinheiten) können vom Harz abgelöst werden und zusammen mit dem gewünschten Reinigungsprodukt eluiert werden. Wird Avidin hingegen als Monomer-Untereinheit an ein Harz (z. B. vernetzt an Agarosebeads oder UltraLink Harz) gekoppelt, bleibt zwar die Spezifität für Biotin erhalten, doch die Biotin-Bindungsaffinität sinkt auf ein Niveau (Kd = 10^-8 M), das die nachfolgende Elution begünstigt.

Besondere Merkmale:

• Nicht denaturierend – Reinigt biotinylierte Produkte unter milden Elutionsbedingungen (2 mM freies Biotin)

• Wiederverwendbar – Monomere Avidin-Agarose kann mindestens 10-mal regeneriert und wiederverwendet werden, wobei der Verlust der Biotin-Bindungskapazität marginal bleibt (annähernd 2,5 % pro Regeneration)

• Spezifisch – Beibehaltung der Biotin-Bindungsspezifität und der geringen unspezifischen Bindung von nativem Avidin

• Flexibel – Bindung von Proben in einer Vielzahl von physiologischen Puffern und Eluieren entweder mit 0,1 M Glycin oder in Konkurrenz mit 2 mM Biotin

• Gute Bindungskapazität – Größer als 1,2 mg biotinyliertem BSA/ml Harz

• Praktisch – Der Käufer hat die Wahl zwischen Standalone-Agarose oder UltraLink™ Harzen oder einem kompletten Reinigungskit mit vorgepackten Säulen und Puffern

Produktspezifische Merkmale:

• Agarose-Harze und das Kit basieren auf vernetzten, 4%igen Agarosebeads
• UltraLink Harz besteht aus einem Acrylamid-Träger (UltraLink Biosupport)

Enthält:

Das Kit enthält eine vorgepackte Säule mit monomerer Avidin-Agarose sowie Bindungs- und Elutionspuffer.