Thermo Scientific™ Immobilisiertes Papain (Agaroseharz)

Beschreibung

Thermo Scientific™ Pierce Immobilized Papain besteht aus einer Cystein-Endopeptidase (Papain), die auf Agarose-Beads immobilisiert wurde, um die Erzeugung und Reinigung von Fab-Fragmenten aus Antikörpern zu ermöglichen.

Papain ist eine unspezifische Cystein-Endopeptidase, die aus Papaya-Latex isoliert ist und in einer Vielzahl von Anwendungen verwendet wird. Wenn IgG-Moleküle bei Vorhandensein von Cystein mit Papain inkubiert werden, werden eine oder mehrere Peptidbindungen im Scharnierbereich aufgeteilt, wodurch drei Fragmente ähnlicher Größe entstehen Zwei Fab-Fragmente und ein Fc-Fragment. Die Fc-Fragmente können mit immobilisiertem Protein A oder durch Ionenaustauschchromatographie von den Fab-Fragmenten getrennt werden. Das 50-Kilodalton-Fc-Fragment wird häufig zur Bestimmung der Spezifität der Fc-Rezeptoren ohne Interferenz durch Antigenbindung verwendet. Fab-Fragmente sind in immunhistochemischen Studien nützlich, da die Fragmente besser in das Gewebe eindringen als intaktes IgG. Außerdem wird eine unspezifische Bindung von Fc-Rezeptoren vermieden, indem nur der Fab-Anteil des Immunglobulins verwendet wird. Papain kann zur Erzeugung von F(ab')2-Fragmenten verwendet werden. Zur Vorbereitung von F(ab')2-Fragmenten wird der Papain zuerst mit 10 mM Cystein aktiviert, das dann über die Gelfiltration entfernt wird. Wenn während der Papain-Verdauung kein Cystein vorhanden ist, können F(ab')2-Fragmente erzeugt werden. Diese Fragmente sind oft inkonsistent und die Reproduzierbarkeit ist ein Problem. Immobilisiertes Papain kann in fast jeder Anwendung durch freies Papain ersetzt werden und ist von Vorteil, da es die Autolyse praktisch eliminiert, die Kontamination einer Probe mit der Protease vermeidet und die Verdauung durch Entfernen des Papains oder Steuern des Probenflusses über eine immobilisierte Papain-Säule kontrolliert. Immobilisiertes Papain ist außerdem stabiler gegen wärmebedingte Denaturierung, was zu einer längeren Aufrechterhaltung der Aktivität führt.

Leistungsmerkmale:

• Träger: Vernetzte 6 %-igegekörnte Agarose
• Spezifische Aktivität: 16 - 40 BAEE-Einheiten/ml Papain vor der Beladung
• Beladung: 250 μg Papain/ml Gel
• Form: Aufschlämmung in 50 % Glycerin, 0,1 M Na-Acetat, pH 4,4, 0,05 % Natriumazid

Zusätzliche Funktionen:

• Alternative Bezeichnung: Papaya-Peptidase I
• Spaltet leicht unspezifisch an exponierten Rückständen
• Quelle: Carica papaya latex Molekulargewicht: 23.000
• Protease-Typ: Cystein-Protease
• Zur Fragmentierung von Antikörpern wird in Fab- oder F(ab')2-Fragmente gespalten
• Reaktionsbedingungen pH 6 bis 7, 20 bis 37 °C.
• Inhibitoren: Schwermetalle, Carbonyls, NEM, p-Chloromercuro-Benzoat, E-64