Thermo Scientific™ Pierce™ Kit zur Isolierung von Zelloberflächenproteinen

Das Kit markiert wirksam Proteine, die offene Lysinrückstände und eine ausreichende extrazelluläre Exposition aufweisen. Das Isolierungsverfahren setzt ein zellimpermeables, spaltbares Biotinylierungs-Reagenz (Sulfo-NHS-SS-Biotin) ein, um exponierte primäre Amine der Oberflächenproteine von intakten adhärenten oder Suspensionszellen zu markieren. Anschließend werden die behandelten Zellen geerntet und einer Lyse unterzogen, und die markierten Oberflächenproteine werden der Affinitätsreinigung mit dem Thermo Scientific NeutrAvidin Agarose Resin zugeführt. Die isolierten Zelloberflächenproteine weisen eine kleine, nicht reaktive Markierung der ursprünglich markierten primären Amine auf, sind aber nicht länger biotinyliert (das Biotin bleibt an das Harz gebunden). Das Kit enthält ausreichende Reagenzien für acht Experimente, für die jeweils vier T75 Kolben mit konfluenten Zellen vorgesehen sind.

Leistungsmerkmale:

• Isoliert Zelloberflächenproteine – reduziert die Komplexität des Gesamt-Zellproteins

• Wirksame Wiedergewinnung von markierten Proteinen –Spaltbares Biotin gestattet eine nahezu 100 %ige Wiedergewinnung der isolierten Zelloberflächenproteine

• Praktisch – alle Reagenzien werden in einem einzigen Kit mit kompletten Anleitungen für die Markierung, Zelllyse und Reinigung von Membranproteinen der Zelloberfläche geliefert

• Western Blot Anwendungen – in SDS-PAGE Puffer rückgewonnene Proteine werden direkt auf Polyacrylamid-Gele aufgebracht

• Robustes System – das Protokoll eignet sich für verschiedene Zelllinien, darunter NIH 3T3, HeLa, C6 und A431

Lieferumfang:

Biotinylierungsreagenzien, Zelllysereagenzien, Agaroseaffinitätsharz , verschiedene Puffer und Spin-Säulen für Mikrozentrifuge