Thermo Scientific™ TMTduplex™ Isobaric Mass Tagging Kit

Beschreibung

Aminreaktive Thermo Scientific™ Kits und Reagenzien für die isobare TMT-Atommassenmarkierung ermöglichen die quantitative Markierung von aus Zellen und Geweben extrahierten Proteinen für die Identifizierung und Analyse mittels Massenspektrometrie.

Änderungen der Proteinexpression und posttranslationale Modifikationen sind wesentliche Mechanismen der biologischen Regulation und Krankheitsentstehung. Technische Fortschritte in der Massenspektrometrie (MS) und Bioinformatik sowie neue Quantifizierungsmethoden wie die markierungsfreie Quantifizierung, metabolische Markierung und das chemische Tagging ermöglichen heute die hochpräzise Identifizierung und quantitative Analyse tausender Proteine in einer einzelnen Probe.^{1, 2}

Bei der TMT-Methode dienen isobare chemische Tags als leistungsstarke Marker für die gleichzeitige Identifikation und Quantifizierung von Proteinen in unterschiedlichen Proben mithilfe der Tandem-Massenspektrometrie. Dies sind kleine chemische Moleküle mit identischer Struktur, die kovalent an die freien Aminoenden der Lysinreste von Peptiden und Proteinen binden. Auf diese Weise lassen sich verschiedene Peptide in einer Probe markieren. Während der MS/MS-Analyse erzeugt jedes isobare Tag eine eindeutige Reporter-Ionen-Signatur, die eine Quantifizierung ermöglicht. In einer regulären MS-Analyse sind die markierten Peptide nicht voneinander zu unterscheiden; im Tandem-MS-Modus werden Peptide jedoch isoliert und fragmentiert, und jedes Tag erzeugt ein eindeutiges Reporter-Ion. Die Proteinquantifizierung erfolgt dann durch Vergleich der Intensitäten der sechs Reporter-Ionen in den MS/MS-Spektren.

Leistungsmerkmale:

• Proteinidentifizierung und Quantifizierung mehrerer Proben, die Zellen, Gewebe oder biologische Flüssigkeiten enthalten Konsistente Chemie sorgt für einen Übergang von der Methodenentwicklung zur Multiplex-Quantifizierung und Entdeckung neuer Biomarker
• Effiziente Markierung von Membranproteinen und posttranslational modifizierten Proteinen Erweiterbares System ermöglicht gleichzeitiges Multiplexing von bis zu sechs verschiedenen Proben in einem einzigen Experiment
• Optimierte Fragmentierung und vollständig unterstützte Quantifizierung mit Proteome Discoverer 1.0 für alle Thermo Scientific LC MS/MS-Plattformen wie LTQ XL- und LTQ Orbitrap XL-Systeme
• Jedes TMT-Tag basiert auf derselben chemischen Struktur, sodass zwischen Experimenten keine Änderung der Markierungs- oder HPLC-Trennungsbedingungen erforderlich ist

Die Tags bestehen aus TMT₀, dem TMT₂-Duplexset und dem TMT₆-Sixplex-Set

• Das Tag TMT₀ ermöglicht das Testen und Optimieren der Probenvorbereitung sowie Markierung, Fraktionierung und MS-Fragmentierung für die Peptididentifizierung und den Reporternachweis ohne teure isotopenmarkierte Verbindungen
• Der Reagenzsatz TMT₂ ermöglicht das Erstellen von Duplex-Proteinprofilen für kleinere Untersuchungen
• Der TMT₆ Reagenzsatz ermöglicht das Erstellen von 6-Plex-Proteinprofilen für mehrere Bedingungen, wie Zeitverläufe, Dosisreaktionen, Replikate oder Probenvergleiche

Empfohlen für:

• Erstellen von Proteinexpressionsprofilen für normale bzw. kranke Zustände oder für Kontrollproben bzw. behandelte Proben
• Quantitative Analyse von Proteinen, für die keine Antikörper verfügbar sind
• Identifizierung und Quantifizierung von Membranproteinen und posttranslational modifizierten Proteinen