Invitrogen™ PichiaPink™ Kit zur Sekretionsoptimierung

Das PichiaPink™ Kit zur Sekretionsoptimierung ist ein neues rekombinantes Proteinexpressionssystem, das auf der Hefe Pichia pastoris basiert. Das PichiaPink™ Kit zur Sekretionsoptimierung bietet Ihnen eine komfortable und kostengünstige Bioproduktion von Schüttelkolben bis zur 1.000-Liter-Produktion Ihres rekombinanten Proteins. Das PichiaPink™ Kit zur Sekretionsoptimierung wird mit unseren neuen Pichia-Stämmen, den pPINK-HC- und pPINK-LC-Vektoren und Sekretsignalsequenzen für die Produktion Ihres Proteins geliefert.

• Erhalten Sie ein komplettes Kit, um mit der Proteinproduktion in Pichia pastoris zu beginnen.
• Screenen Sie Ihre Pichia-Transformanten in kürzester Zeit mittels Auxotrophie und Farbauswahl.
• Reduzieren Sie den Proteinabbau mit Protease-defizienten Pichia pastoris-Stämmen.
• Optimieren Sie die Proteinsekretion mit einer von 8 Sekretsignalsequenzen.

Das PichiaPink™ Kit zur Sekretionsoptimierung enthält:
• PichiaPink™ Vektor-Kit (Kat. Nr. A11152)
• PichiaPink™ Sekretsignalset (Kat. Nr. A11155)
• PichiaPink™ Expressionsstamm-Set (Kat. Nr. A11154)
• PichiaPink™ Medien-Kit (Kat. Nr. A11156)

Eine neue Art, Pichia-Transformanten zu screenen
Das PichiaPink™ Kit zur Sekretionsoptimierung verwendet Adenin-Auxotrophie zur Auswahl von Pichia-Transformanten. Die PichiaPink™ Stämme haben den ade2-Genotyp und erfordern eine Komplementierung mit dem ADE2-Gen, um ohne Adenin wachsen zu können. Auch die Verwendung eines auxotrophen Markers erleichtert die Aufrechterhaltung von Transformanten. Es sind keine Antibiotika erforderlich, um Ihre Transformanten zu erhalten.

Außerdem können Sie Pichia-Transformanten nach Farben screenen. Die nicht transformierten PichiaPink™ Stämme erscheinen als rosafarbene Kolonien, während transformierte PichiaPink™ Stämme als weiße Kolonien erscheinen (Abb. 1).

Neue Expressionsvektoren für Pichia
Das PichiaPink™ Kit zur Sekretionsoptimierung wird mit dem neuen PichiaPink™ Vektor-Kit geliefert. Das Kit enthält zwei Vektoren, pPINK-LC und pPINK-HC. Die pPINK-Vektoren sind um das ADE2-Gen herum aufgebaut, um die ade2-defizienten Pichia-Stämme zu ergänzen. Beide Vektoren verwenden den Methanol-induzierten AOX1-Promotor, um Ihr Protein zu exprimieren. Der pPINK-LC integriert sich bei niedriger Kopienzahl in das Pichia-Genom, während der pPINK-HC-Vektor mit hoher Kopienzahl integriert wird.

Sowohl pPINK-LC- als auch pPINK-HC-Vektoren sind mit dem PichiaPink™ Sekretsignalset kompatibel. Mit einer 3-Wege-Ligation können Sie Ihrem Gen eine von 8 Sekretionssequenzen hinzufügen. Hinweis: Die pPINK-Vektoren exprimieren Proteine standardmäßig intrazellulär.

Sowohl das PichiaPink™ Vektor-Kit (Kat. Nr. A11152) als auch das PichiaPink™ Sekretsignalset (Kat. Nr. A11155) können separat bestellt werden, um das PichiaPink™ Kit zur Sekretionsoptimierung nachzufüllen.

Halten Sie Ihre Proteine intakt
Das PichiaPink™ Kit zur Sekretionsoptimierung wird mit dem PichiaPink™ Expressionsstamm-Set geliefert. Dieses Set enthält die 4 Pichia pastoris-Stämme für die Verwendung mit dem PichiaPink™ Expressionssystem. Alle 4 Stämme verfügen über den ade2-Genotyp. Außerdem enthalten 3 Stämme Knockouts in 2 Protease-Genen. Protease-defizitäre Stämme reduzieren den Bedarf an Proteasehemmern beim Zellwachstum und verbessern die Ausbeute Ihres Proteins. Testen Sie einen einzelnen Protease-Knockout oder den Doppel-Protease-Knockout, um den für Sie am besten geeigneten zu finden.

Sie können das PichiaPink™ Expression Strain Set (Kat Nr. A11154) separat bestellen, um das PichiaPink™ Kit zur Sekretionsoptimierung nachzufüllen.

Medienbeutel für den Einstieg
Das PichiaPink™ Medienkit ist ein Satz praktischer vorgepackter Medienbeutel für die Verwendung mit dem PichiaPink™ Kit zur Sekretionsoptimierung. Das PichiaPink™ Medien-Kit enthält Medien zum Kultivieren von PichiaPink™ Stämmen aus gefrorenen Beständen zu gebrauchsfertigen Kulturen zwecks Transformation und Auswahl. Sie können das PichiaPink™ Media Kit (Kat.- Nr. A11156) separat bestellen, um das PichiaPink™ Kit zur Sekretionsoptimierung nachzufüllen.

Warum sollte man sich für das PichiaPink™ Hefe-Expressionssystem entscheiden?
Das PichiaPink™ Hefe-Expressionssystem basiert auf der Hefe Pichia pastoris. Vorteile der Pichia pastoris sind schnelles Wachstum, gut bekannter genetischer Hintergrund, einfache Medienformulierung und einfache Handhabung. Seit über 30 Jahren wird Pichia pastoris von Laboren weltweit zur Erzeugung von Hunderten verschiedener Proteine aus vielen Spezies, einschließlich der humanen (Ref. 1, 2), verwendet. Das PichiaPink™ Hefe-Expressionssystem ermöglicht eine komfortable und kostengünstige Proteinproduktion in jedem Maßstab.

Informationen zum Erwerb einer kommerziellen Nutzungslizenz für das PichiaPink™ Hefe-Expressionssysteme erhalten Sie unter outlicensing@lifetech.com.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für die therapeutische oder diagnostische Anwendung bei Tieren oder Menschen bestimmt.

Verwandte Links
• Erfahren Sie mehr über das PichiaPink™ Hefe-Expressionssystem.
• Erfahren Sie mehr über unsere anderen Proteinexpressionssysteme.

Literatur

1. Cereghino JL, Cregg JM. Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66. [PubMed]
2. Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM. Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris. Curr Opin Biotechnol. 2002 Aug;13(4):329-32. [PubMed]