Thermo Scientific™ Phusion™ Kit für die ortsspezifische Mutagenese mit DH10B-kompetenten Zellen

Beschreibung

• Dieses Paket enthält ein Phusion Kit für die ortsspezifische Mutagenese und DH10B-kompetente Zellen, die für die Verwendung mit dem Kit optimiert sind
• Phusion Kit für die ortsspezifische Mutagenese
  • Mit diesem Kit wird das gesamte Plasmid mit phosphorylierten Primern amplifiziert, die die gewünschten Änderungen einführen
  • Das amplifizierte, lineare PCR-Produkt, das die gewünschte Mutation enthält, wird in einer 5-minütigen Ligationsreaktion mit T4 DNA-Ligase zirkuliert. Das resultierende Plasmid kann dann in beliebige E. coli-Zellen transformiert werden. Die DH10B-kompetenten Zellen werden zur Verwendung mit dem Kit empfohlen.
  • Die optimale Annealing-Temperatur für die Phusion DNA-Polymerasen kann sich erheblich von der optimalen Temperatur für Taq-basierte Polymerasen unterscheiden. Berechnen Sie daher für optimale Ergebnisse zunächst die erforderliche Temperatur mit unserem Tm-Rechner.
  • Robuste und zuverlässige Methode zur exponentiellen Amplifikation
  • Keine Anforderungen wie spezielle Vektoren, Restriktionsstellen oder Methylierungsstatus für das Zielplasmid
  • Die Startvorlage muss nicht in einem separaten Schritt aufgelöst werden
  • Die Phusion Hot Start II High-Fidelity DNA-Polymerase minimiert unerwünschte sekundäre Mutationen
  • Amplifikation großer Plasmide von bis zu 10 kb
  • Die Hot-Start-Modifikation der Polymerase verhindert die Amplifikation unspezifischer Produkte und unerwünschte Zersetzung von Primern vor dem ersten PCR-Zyklus
  • T4 DNA-Ligase ist im Kit enthalten; keine Aufreinigungsschritte vor oder nach der Ligation erforderlich
• DH10B-kompetente Zellen
  • Hocheffiziente, chemisch kompetente E. coli-Zellen
  • Der DH10B-Stamm eignet sich zum Klonieren von DNA, die Methylzytosin und Methyladenin enthält, und ermöglicht so effizientes Klonieren sowohl prokaryotischer als auch eukaryotischer genomischer DNA
  • Diese Zellen sind ideal für den Aufbau von cDNA-Bibliotheken mit Plasmidvektoren
  • Genotyp: F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ– rpsL(StrR) nupG