Thermo Scientific™ Phusion™ Hot Start II DNA-Polymerase- und dNTP-Mix (je 10 mM)

Phusion Hot-Start II High-Fidelity DNA-Polymerase

Thermo Scientific™ Phusion High-Fidelity DNA-Polymerasen setzen einen hohen Standard für die Hochleistungs-PCR. Mit einer 52 Mal niedrigeren Fehlerrate als Taq und einer 6 Mal niedrigeren Fehlerrate als Pfu ist Phusion High-Fidelity DNA-Polymerase eine ausgezeichnete Wahl für Klonierungen und andere Anwendungen, bei denen eine hohe Genauigkeit ausschlaggebend ist. Sie bieten eine zuverlässige Leistung mit kurzen Protokollzeiten, auch in Gegenwart von PCR-Inhibitoren, und erzeugen höhere Ausbeuten mit geringeren Enzymmengen als andere DNA-Polymerasen.

• Hohe Wiedergabetreue (52X Taq)
• Keine unspezifische Amplifikation und Primer-Degradation während des Reaktionsaufbaus
• Schnelle PCR dank kurzer Extensionszeiten (15 bis 30 s/kb)
• Höhere Produktausbeute bei geringen Enzymmengen

Mit Phusion™ Hot-Start II High-Fidelity DNA-Polymerase verläuft die Amplifikation ohne Herstellung unspezifischer Produkte, und zwar aufgrund der Kombination von Phusion™ DNA-Polymerase und einem reversibel gebundenen, spezifischen Affibody-Liganden, der die DNA-Polymerase-Aktivität bei Raumtemperatur hemmt. Der Affibody-Ligand hemmt auch die 3´→5´-Exonuklease-Aktivität der Polymerase und verhindert so den Abbau von Primern und der Template-DNA beim Ansetzen der Reaktion. Bei Temperaturen, die Polymerase-Aktivität fördern, wird der Ligand freigesetzt, was zur vollständigen Aktivierung der Polymerase führt. Die Phusion™ Hot-Start II DNA-Polymerase wird bei hohen Temperaturen sofort wieder aktiviert. Deshalb erfordert sie bei PCR-Protokollen keinen separaten Aktivierungsschritt.

Verwendung der Phusion™ DNA-Polymerasen

Die Regeln für das Annealing von Phusion™ DNA-Polymerasen unterscheiden sich von vielen gängigen DNA-Polymerasen (z. B. Taq DNA-Polymerasen). dNTP-Mix Thermo Scientific™ dNTP-Mix enthält vorgemischte wässrige Lösungen von dATP, dCTP, dGTP und dTTP mit jeweils einer Endkonzentration von 10 mM. Die Nukleotide haben eine Reinheit von mehr als 99 % und sind frei von Nuklease-Aktivitäten sowie menschlicher DNA und E. coli-DNA. Die Mischungen bieten die Möglichkeit, die Anzahl der Pipettierschritte und das Risiko von Fehlern beim Reaktionsaufbau zu reduzieren.

• Reinheit höher als 99 %, bestätigt durch HPLC
• Frei von menschlicher und E. coli-DNA
• Stabil auch nach mehreren Einfrier-Auftau-Zyklen
• Bis zu 95 % der dNTPs bleiben in Triphosphat-Form bei Raumtemperatur auch nach 7 Wochen erhalten
• Bis zu 90 % der dNTPs bleiben in Triphosphat-Form nach 30 PCR-Zyklen (1 min bei 94 °C; 3 min bei 72 °C) erhalten

Zur Verwendung in sämtlichen molekularbiologischen Anwendungen, einschließlich PCR, Real-Time-PCR, High-Fidelity PCR, Long Range PCR, LAMP-PCR, cDNA-Synthese, RT-PCR, RDA, MDA, DNA-Markierung und DNA-Sequenzierung.