Invitrogen™ Phospha-Light™ SEAP Reporter Gene Assay System

• Der Nachweis des sezernierten Reporters ermöglicht die Analyse, ohne wertvolle Zellen zu zerstören.
• Der große Dynamikbereich des Assays alkalischer Phosphatase ermöglicht dem Anwender die präzise Messung des Enzympegels in einem Bereich von Femtogramm bis Nanogramm.
• Die Empfindlichkeit des Assays ist 100- bis 1.000-mal höher als bei isotopischen/nicht isotopischen Assays für Chloramphenicol-Acetyltransferase (CAT) oder bei kolorimetrischen/Fluoreszenz-Assays für -Galactosidase. Dieser Assay bietet somit eine höhere Empfindlichkeit als vergleichbare Assay-Technologien.
• Der hochempfindliche Assay mit großem Dynamikbereich ermöglicht den Nachweis hoher und niedriger Reportermengen, ohne die Probe mehrfach verdünnen zu müssen.
• Das nicht radioaktive Reporter-Genassay-Kit beseitigt Bedenken hinsichtlich der Verwendung von Radioisotopen
• Der Assay kann in etwa einer Stunde abgeschlossen werden, was eine schnelle Testdurchführung ermöglicht

Überwachen Sie die Expression über einen längeren Zeitraum
Das Phospha-Light Assay-System ermöglicht den empfindlichen Nachweis des sezernierteren Reporterproteins alkalischer Phosphatase (SEAP) in Zellkulturmedien. Das SEAP-Genprodukt ist eine verkürzte Form der humanen plazentaren alkalischen Phosphatase. Durch das sezernierte Reporterprotein wird die Vorbereitung von Zellextrakten überflüssig. Eine Zellpopulation kann über einen bestimmten Zeitraum überwacht werden und bleibt für weitere Experimente intakt.

Proprietäre Reagenzien für einen hochgradig empfindlichen Nachweis
Das Phospha-Light Assay-System ist eine der einfachsten und schnellsten Methoden zur Optimierung der Transfektionseffizienz. Der mit dem Phospha-Light Assay erzielte hochempfindliche Nachweis wird durch die Kombination proprietärer Reagenzien erzielt. Das System umfasst leistungsfähige CSPD™ Substrate der alkalischen Phosphatase, Emerald™ Lumineszenz-Verstärker und ein einzigartiges Puffersystem, das speziell auf die Aktivitätshemmung nicht plazentarer endogener alkalischer Phosphatase ausgelegt ist. Das anhaltende Leuchten des Chemolumineszenz-Signals ermöglicht den Einsatz von Luminometern ohne Injektoren für die Messung.

Anwendungen
Das Phospha-Light Reportergen-Assay-System wird weitgehend für Reportergen-Assays zur Messung der Genexpression in etablierten Zelllinien und transfizierten Primärzellen eingesetzt, unter anderem auch zum Auslesen von Gen-Knockdowns/RNA-Interferenzen. Der Phospha-Light Reportergen-Assay wird für viele verschiedene viralen Funktions-Assays verwendet, einschließlich viraler Genexpressionsassays, viraler Replikation, viraler Fusogenität, Virusneutralisierung, viral vermittelter Zellzellfusion sowie viraler Infektiosität. Die Verwendung des SEAP-Reporterproteins ist sehr gut für In-vivo-Reporter-Genassays geeignet, indem Serumproben von transgenen, transfizierten oder viralen vektorinfizierten Tieren getestet werden. Das Phospha-Light Reportergen-Assay-System wird außerdem zur Messung der SEAP-Konzentration in Seren transgener oder transfizierter ganzer Tiere, darunter in Seren von Mäusen, Ratten, Marmosetten, Affen und Schweinen, sowie in der Allantoinflüssigkeit von Hühnern eingesetzt. Erst kürzlich wurde das SEAP-Protein in Mäusen (mSEAP) zur Verbesserung der Stabilität des SEAP-Proteins bei transgenen Mäusen entwickelt, wobei das Phospha-Light System für den empfindlichen Nachweis von mSEAP eingesetzt wurde.

Spezifikationen

• Kompatible Zellen: Säugetierzellen
• Nachweisverfahren. Chemolumineszenz
• Zur Verwendung mit (Geräte): Luminometer (Mikrotiterplatte)
• Form: Flüssig
• Format: 96-Well-Platte
• Mit hohem Durchsatz kompatibel: Hochdurchsatzkompatibel
• Anzeige: Endpunkt
• Probentyp (spezifisch): Zellkulturen
• Substrat: CSPD™
• Substrateigenschaften: Chemisches Substrat
• Substrattyp: AP-Substrat (alkalische Phosphatase)
• Zielenzym: Alkalische Phosphatase