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OPTIZYME™ Alol, Fisher BioReagents™

Artikelnummer. 11994822
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Menge:
100 E
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Artikelnummer. 11994822 Lieferant Fisher BioReagents Lieferanten-Nr. BP80751
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Beschreibung

5'...^ 7(N) G A A C (N)6 T C C (N)12-13^...3'
3'...^12-13(N) C T T G (N)6 A G G (N)7 ^...5'

Im Lieferumfang enthalten: 10x OPTIZYME Puffer 5
Bedingungen für 100 %-Aktivität:

  • 1X OPTIZYME Puffer 5: 10 mM Tris-HCl (pH 8.5 bei 37° C), 10 mM MgCl2, 100 mM KCl und 0.1 mg/ml BSA
  • Bei 30 °C inkubieren
Enzymaktivität in OPTIZYME Puffern:
  • Puffer 1: 0 Bis 20 %
  • Puffer 2: 0 Bis 20 %
  • Puffer 3: 0 Bis 20 %
  • Puffer 4: 20 Bis 50 %
  • Puffer 5: 100 %
Lagerungspuffer:
  • 10Mm Tris-HCl (pH 7.4 bei 25 °C),100 mM KCl,1 mM DTT,1 mM EDTA,0.2 mg/ml BSA und50 % (v/v) Glycerin
  • Ligation und erneutes Schneiden:
  • Etwa 70 % der DNA-Fragmente können nach 10-facher Überverdauung mit Aloi ligiert und mehr als 80 % davon erneut geschnitten werden.
  • Hinweise:
    • Inkubation bei 37 °C führt zu einer 20%igen Aktivität.
    • AloI erzeugt Doppelstrangschnitte auf beiden Seiten der unterbrochenen Erkennungsstelle. Sein einzigartiges Merkmal ist ein degenerierter Spaltort an der 3'-Seite der Erkennungssequenz (12 oder 13 Nukleotide weit entfernt).
    • Die Anwesenheit von S-Adenosylmethionin im Reaktionsgemisch führt zu unvollständiger Spaltung mit AloI.
    • Ein mehr als 10-facher Überverdau mit AloI kann zu Star-Aktivität führen.
    • AloI kann mit der gespaltenen DNA verbunden bleiben. Dies kann eine DNA-Bandenverlagerung während der Elektrophorese zur Folge haben. Verwenden Sie zur Vermeidung atypischer DNA-Bandenmuster den 6-fachen DNA Ladepuffer und die SDS-Lösung für die Probenvorbereitung oder erhitzen Sie die verdaute DNA in Gegenwart von SDS vor der Elektrophorese.
    Methylierungseffekte:
    Dam: Kann überlappen – Auswirkung unbestimmt
    • 5'...GAAC(N)4Gm6A TCC...3'
  • 3'...CTTG(N)4C Tm6AGG...5'
  • (Schneideeffektivität nicht bestimmt)
  • Dcm: Kann überlappen – keine Auswirkung
    • 5'...GAAC(N)6TCm5CW GG...3'
  • 3'...CTTG(N)6AG GWm5CC...5'
  • (Keine Auswirkung auf das Schneiden)
  • CpG: Kann überlappen – Schneiden ist beeinträchtigt
    • 5'...m5C GAAC(N)6TCC...3'
  • 3'... Gm5CTTG(N)6AGG...5'
  • (Schneiden ist blockiert)
    • 5'...GAAC(N)6TCm5C G...3'
  • 3'...CTTG(N)6AG Gm5C...5'
  • (Keine Auswirkung auf das Schneiden)
    • 5'...GAAm5C G(N)5TCC...3'
  • 3'...CTT Gm5C(N)5AGG...5'
  • (Keine Auswirkung auf das Schneiden)
  • EcoKI: Nie überlappend – keine Auswirkung
  • EcoBI: Nie überlappend – keine Auswirkung

    • TRUSTED_SUSTAINABILITY

    Spezifikation

    Konzentration 1 bis 3 U/μl
    Komponenten 25 bis 50 % Wasser, >50 % Glycerin
    Inkubatortemperatur 30 °C
    pH 7,4
    Zur Verwendung mit (Anwendung) >95 % der DNA-Fragmente können nach einer 50-fachen Überverdauung mit Alol ligiert und erneut geschnitten werden
    Lagerungspuffer 10 mM Tris HCl (pH 7,4 bei 25 °C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0,2 mg/ml BSA, 50 % Glycerin
    Inhalt und Lagerung Den Behälter dicht geschlossen halten
    Menge 100 E
    Schnittstelle (7/12)GAAC(N)6TCC(12/7)
    Produkttyp AloI
    Form Flüssig
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    Name des Produkts
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