Invitrogen™ Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor (BacMam 2.0)

Beschreibung

Der Premo™ FUCCI Zellzyklus-Sensor ist ein fluoreszierender, zweifarbiger Sensor für Zellzyklus-Progression und -Teilung bei lebenden Zellen. Er ermöglicht eine präzise und empfindliche Zellzyklus-Analyse einzelner Zellen oder einer Zellpopulation durch Fluoreszenzmikroskopie, Durchflusszytometrie oder High-Content-Bildgebung. Der Premo FUCCI Zellzyklussensor nutzt die hocheffiziente BacMam 2.0 Technologie, die Zellzyklusstudien bei praktisch jedem Zelltyp ermöglicht. In einem gebrauchsfertigen Format  — einfach hinzufügen, inkubieren und betrachten. Premo FUCCI ermöglicht eine hocheffiziente transiente Expression in Zelllinien, Primärzellen und Stammzellen.

• Präzision: Zellzyklusgesteuerte Expression von hellen GFP- und RFP-Indikatoren für die Live-Zellanalyse einzelner Zellen oder Populationen
• Hocheffizient: >90 % Transduktion bei einer Vielzahl von Säugetierzelllinien, einschließlich Primärzellen, Stammzellen und Neuronen
• Schnell und bequem: Fügen Sie Ihren Zellen einfach den Premo FUCCI Zellzyklus-Sensor als komplettes Medium hinzu, inkubieren Sie über Nacht und analysieren Sie
• Sicher: BacMam Reagenzien integrieren und replizieren sich nicht in Säugetierzellen, haben keine wahrnehmbare zellschädigende Wirkung und sind für Umgang auf Biosicherheitsstufe (BSL) 1 geeignet

Einfache und schnelle Zellzyklusvisualisierung
Fügen Sie Ihren Zellen einfach den gebrauchsfertigen Premo™ FUCCI Zellzyklussensor als vollständige Medium hinzu, inkubieren Sie über Nacht und visualisieren Sie die Zellzyklus-Progression in Zellpopulationen mit Fluoreszenzmikroskopie, Durchflusszytometrie oder High-Content-Bildgebungsgeräten. Die Zellen wechseln von rot in der G1-Phase zu gelb in der G1/S-Zwischenphase und zu grün in den S-, G2- und M-Phasen, da Fusionen von emGFP und TagRFP in Verbindung mit zwei zellzyklusregulierten Proteinen exprimiert und degradiert werden.
Funktionsweise
Premo FUCCI wird aus dem Fluoreszenz-Ubiquitinations-Zellzyklus-Indikator (FUCCI) abgeleitet, der von Miyawaki und Kollegen entwickelt wurde. FUCCI basiert auf den zwei zellzyklusregulierten Proteinen Geminin und Cdt1, die zu einem grünen (emGFP) bzw. roten (TagRFP) fluoreszierenden Protein fusioniert sind. Da Cdt1 und Geminin nur in bestimmten Phasen des Zellzyklus vorhanden sind, ist der fluoreszierende Proteinpartner ähnlich zellzyklusabhängig. Ubiquitination durch spezifische Ubiquitin-E3-Ligasen zielt auf die Fusionskonstrukte im Proteasom für den Abbau ab. E3-Ligasen zeigen eine zeitliche Regelung der Aktivität an, was zu einem zweiphasigen Zyklus der Geminin- und Cdt1-Spiegel während des Zellzyklus führt. Geminin-GFP wird in der G1-Phase abgebaut; das Vorhandensein von Cdt1-TagRFP wird durch rote Fluoreszenz innerhalb der Zellkerne angezeigt. Während der Phasen S, G2 und M wird Cdt1 jedoch abgebaut, und nur Geminin-GFP bleibt erhalten, wodurch die Zellen grün fluoreszierende Kerne erhalten. Während des G1/S-Übergangs, wenn die Cdt1-Spiegel abnehmen und die Geminin-Spiegel ansteigen, sind beide Proteine vorhanden, was ein gelb fluoreszierendes Kernsignal erzeugt. Diese dynamische Farbänderung (rot zu gelb zu grün) zeigt deutlich den Verlauf durch den Zellzyklus und die Zellteilung an.

Nutzt die BacMam 2.0 Technologie
BacMam Technologie basiert auf einem Insektenvirus (Baculovirus) für effiziente Transduktion und transiente Expression in Säugetierzellen. Der Premo™ FUCCI Zellzyklussensor verwendet die BacMam 2.0 Technologie, um Zellzyklus-Studien in praktisch jedem Zelltyp von Zelllinien bis Stammzellen zu ermöglichen. Dies geschieht durch die Verwendung einer Säugetier-Expressionskassette für das FUCCI-Konstrukt. Im Vergleich zur BacMam 1.0 Technologie benötigt BacMam 2.0 keinen Enhancer und kann in einem kompletten Medium verwendet werden. Es ist nicht notwendig, Plasmid zu reinigen oder sich Gedanken über Vektorintegrität und -qualität zu machen. Es sind keine Lipide, Farbstoff-beladende Chemikalien oder andere potenziell schädliche Behandlungen erforderlich. BacMam 2.0 enthält Elemente, die die Transduktionseffizienz und Expressionswerte erheblich verbessern: Ein pseudotypes Kapsid-Protein für einen effizienteren Zelleingang, einen verbesserten CMV-Promotor und das posttranskriptionell regulatorische Element des Woodchuck Hepatitis-Virus (WPRE).

Titrierbare Expression, die bis zu zwei Wochen dauert
Die transiente Transgenexpression dauert von etwa 5 Tagen in transformierten Zelllinien bis zu zwei Wochen in langsam teilenden Zellen, wie z. B. einigen primären Zelltypen; wir haben terminal differenzierte Neuronen mehr als drei Wochen nach der Transduktion abgebildet. Darüber hinaus ermöglicht die BacMam Technologie eine definierte Optimierung, da sie Ihnen die Möglichkeit gibt, Expressionsebenen präzise zu titrieren. Baculoviren replizieren sich weder in Säugetierzellen, noch werden virale Gene exprimiert, was ihnen ein hervorragendes Sicherheitsprofil verleiht und zytopathische Effekte bei Säugetierzellen verhindert.

Zellanalyse, Zellzyklus, Zellproliferation, Zellviabilität, Proliferation und Funktion, Zelluläre Bildgebung, Immunzytochemie (ICC), Immunfluoreszenz (IF)

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