Invitrogen™ Amplex™ Red Sphingomyelinase Assay Kit

Le kit de dosage de sphingomyélinases Amplex Red constitue une méthode fluorométrique sensible, rapide et simple pour détecter de très faibles concentrations de sphingomyélinases à l’aide d’un lecteur de microplaques par fluorescence ou d’un fluorimètre. Avec ce dosage couplé à une enzyme, l’activité de la sphingomyélinase est surveillée indirectement à l’aide de 10-acétyl-3,7-dihydroxyphénoxazine (réactif Amplex Red), une sonde fluorogénique sensible au peroxyde d’hydrogène. La sphingomyélinase hydrolyse la sphingomyéline pour produire de la céramide et de la phosphorylcholine. La phosphatase alcaline est ajoutée, ce qui hydrolyse la phosphorylcholine pour former de la choline. La choline est ensuite oxydée par la choline oxydase pour former de la bétaïne et du peroxyde d’hydrogène. En présence de péroxydase de raifort, le peroxyde d’hydrogène réagit avec le réactif Amplex Red selon un rapport stœchiométrique de 1:1, produisant ainsi de la résorufine, un produit hautement fluorescent. La résorufine a une capacité d’absorption et d’émission de fluorescence maximale d’environ 571 nm et 585 nm, respectivement. Les interférences causées par les autofluorescences dans la plupart des échantillons biologiques sont donc minimes.

• Détecte des niveaux d’activité de la sphingomyélinase à partir de 80 μU/ml dans un volume de dosage de 200 μlitres
• Format permettant d’effectuer des mesures à différents points dans le temps
• Conçu pour un minimum d’interférence de l’autofluorescence
• Conception et emballage de matrice de dosage personnalisés également disponibles

Utilisation des dosages Amplex Red pour une gamme étendue d’enquêtes
Une grande variété de dosages Amplex Red validés sont disponibles pour l’étude de la signalisation cellulaire et des lipides, de la neurobiologie, de l’inflammation et de la fonction immunitaire, et du métabolisme. Nous proposons également Amplex UltraRed, un réactif de deuxième génération caractérisé par une plus grande sensibilité et une fluorescence plus brillante, ainsi que le réactif d’arrêt Amplex Red/UltraRed. Parce qu’il permet de terminer la réaction générant le signal de fluorescence à un moment défini par l’utilisateur, le réactif d’arrêt Amplex Red/UltraRed est synonyme de practicité et de contrôle. Une fois le réactif d’arrêt ajouté, le signal de fluorescence reste stable pendant au moins trois heures.

Dosages d’activité enzymatique et protéique, activité de la lipase et de la phopholipase, protéines, expression, isolement et analyse