Thermo Scientific™ Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit für RT-qPCR

Beim Thermo Scientific Maxima First Strand-Synthese-Kit für die RT-qPCR handelt es sich um ein anwenderfreundliches System, das für die cDNA-Synthese in 2-stufigen, quantitativen Real-Time PCR-Anwendungen (RT-qPCR) optimiert wurde. Im Kit enthalten ist die Maxima Reverse Transkriptase (RT) – ein leistungsstarkes Enzym, das durch die In-vitro-Evolution von M-MuLV RT hergestellt wurde. Das Enzym zeichnet sich durch eine hohe Thermostabilität und Robustheit aus und bietet im Vergleich zur Wildtyp M-MuLV RT eine höhere cDNA-Syntheserate.
Das Maxima Erststrang-cDNA-Synthese-Kit für die RT-qPCR ermöglicht eine reproduzierbare cDNA-Synthese aus unterschiedlichen Mengen von Gesamt-RNA (1 pg bis 5 μg) bei erhöhten Temperaturen (42 bis 65 °C). Die Synthesereaktion kann innerhalb von 15 bis 30 Minuten abgeschlossen werden. Komponenten des Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit für die RT-qPCR sind bereits vorgemischt. Dies spart Zeit und verringert die Möglichkeit von Fehlern beim Pipettieren.
Das neue Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit mit dsDNase ermöglicht einen stark vereinfachten Arbeitsablauf, der die Entfernung genomischer DNA und die cDNA-Synthese in einem Ein-Röhrchen-Verfahren vereint. Das Kit enthält eine neuartige, Doppelstrang-spezifische DNase (dsDNase), die entwickelt wurde, um kontaminierende genomische DNA aus RNA-Präparaten innerhalb von 2 Minuten zu entfernen, ohne die Qualität oder Menge der RNA zu beeinträchtigen. Die hochspezifische Aktivität gegenüber doppelsträngiger DNA gewährleistet, dass einzelsträngige DNA (wie cDNA und Primer) nicht gespalten wird und mit dsDNase behandelte RNA direkt zur reversen Transkription zugegeben werden kann.

Besondere Merkmale

• Integrierter Schritt zur Entfernung von gDNA
• Hohe Ausbeuten von Volllängen-cDNA (bis zu 20 kb).
• Effiziente cDNA-Synthese über einen breiten Temperaturbereich von 42 °C bis 65 °C.
• Beschleunigte Synthese: komplette cDNA-Synthese in 15 bis 30 Minuten.
• Hohe Empfindlichkeit und Spezifität

Anwendungen

• 2-Schritt-RT-PCR
• Zweistufige RT-qPCR

Enthält
Inhalt des Maxima Erststrang-cDNA-Synthese-Kits für die RT-qPCR

• Maxima Enzymgemisch (Maxima Reverse Transkriptase und RiboLock RNase-Inhibitor)
• 5X Reaktionsgemisch (Reaktionspuffer, dNTPs, Oligo(dT)₁₈- sowie Random-Hexamer-Primer)
• Nukleasefreies Wasser

Inhalt des Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit mit dsDNase

• Maxima Enzymgemisch (Maxima Reverse Transkriptase und RiboLock RNase-Inhibitor)
• 5x Reaktionsgemisch (Reaktionspuffer, dNTPs, Oligo(dT)18- sowie Random-Hexamer-Primer)
• dsDNase
  • 10 x dsDNase-Puffer
• Nukleasefreies Wasser

Zusätzliche Informationen zu den Reaktionskomponenten
Der im Maxima Enzymgemisch enthaltene, rekombinante RiboLock RNase-Inhibitor schützt RNA-Templates effektiv vor dem Abbau durch die RNasen A, B und C bei Temperaturen bis 55 °C.

Oligo(dT)₁₈- und Random-Hexamer-Primer werden mit dem Kit geliefert. Die Random-Hexamer-Primer binden nicht spezifisch und werden verwendet, um cDNA von allen RNAs in einer RNA-Gesamtpopulation zu synthetisieren. Der Oligo(dT)₁₈-Primer bindet selektiv an das 3'-Ende der Poly(A)-RNA, was dazu führt, dass cDNA nur von mRNA mit Poly(A)-Schwanz synthetisiert wird. Zudem können mit dem Kit genspezifische Primer verwendet werden, um die Synthese von einer bestimmten Sequenz ausgehend zu starten.

Wasser, Nuklease-frei ist zur Reaktionsvorbereitung und Verdünnung der Proben-RNA im Lieferumfang enthalten. Mit Hilfe geeigneter Qualitätsprüfungen wurde sichergestellt, dass keine Endo-, Exodesoxyribonukleasen, Ribonukleasen und Phosphatasen vorhanden sind.

Maxima Universal First Strand cDNA-Synthesekit
Nur in den USA und Kanada erhältlich.

Das Maxima Universal First Strand cDNA-Synthesekit unterscheidet sich vom Maxima Erststrang-cDNA-Synthese-Kit darin, dass das Maxima Universal First Strand cDNA-Synthesekit über separate Komponenten verfügt.

Gefahrstoff: Nein
Qualitätskontrolle:

• Funktional getestet in zweistufiger RT-qPCR unter Verwendung verschiedener RNA-Transkript-Startmengen (5 ng bis 0,6 fg) durch reverse Transkriptionsreaktionen und anschließend durch Amplifikation mit Maxima SYBR Green/ROX qPCR-Mastermix.
• Der Wirkungsgrad liegt im Bereich von 90 bis 110 %, die Steigung liegt zwischen -3,09 und -3,58 mit einem Korrelationskoeffizienten von > 0,99.

Versandbedingungen: Trockeneis
Lagerungsbedingungen: −20 °C