IBA Lifesciences M6 Adapterset

Beschreibung

Das Strep-tag™ Aufreinigungssystem basiert auf der hoch selektiven und leicht kontrollierbaren Interaktion zwischen dem Strep-tag™II Peptid und dem Biotin-Bindungsort eines speziell entwickelten Streptavidin namens Strep-Tactin™.
Strep-tag™II bindet Strep-Taktin™ fast 100-mal enger als Streptavidin, aber eluiert unter schonenden, physiologischen Bedingungen. Eine schnelle Affinitätsreinigung in einem Arbeitsschritt führt zu aktiven Fusionsproteinen von höchster Reinheit. Physiologische Puffer, wie etwa PBS, können in Kombination mit einer Vielzahl von Reinigern, Chelatoren, Salz und Redox-Bedingungen verwendet werden. Die Konkurrenz-Elution mit Desthiobiotin, einem kostengünstigen, reversibel bindenden und stabilen Analogon von Biotin, ermöglicht einzigartige Reinigungsfaktoren. Das System ist sicher und einfach zu bedienen; die Regeneration der Säule und der Aktivitätsstatus werden durch eine Farbänderung an der Reinigungssäule visualisiert. Ein besonderer Vorteil von Strep-tag™II ist die neutrale Aminosäurezusammensetzung, die die Proteinfaltung oder -sekretion weder behindert noch die Proteinfunktion beeinträchtigt. Strep-tag™ ermöglicht die Aufreinigung rekombinanter Proteine von Rohlysaten mit einer Reinheit von über 99 % in einem einzigen Schritt. Die außergewöhnlichen Reinigungsfaktoren basieren auf i) der sehr niedrigen Tendenz von Strep-Tactin™, andere Proteine unspezifisch zu binden, ii) der hochspezifischen Interaktion zwischen Strep-tag™II und Strep-Tactin™ und iii) der spezifischen Konkurrenz-Elution mit winzigen Mengen an Desthiobiotin. Darüber hinaus ist die extreme Stabilität von Strep-Tactin™ die Basis robuster Affinitätsharze.
Der Strep-tag™ Proteinreinigungszyklus
Reinigungsverfahren unter physiologischen Bedingungen. Die Reinigung von Strep-tag™II-Fusionsproteinen kann unter nahezu physiologischen Bedingungen, z. B. im PBS-Puffer und für die Elution in PBS/2.5 mM Desthiobiotin-Puffer erfolgen.
Schritte 1 und 2:
Das Zelllysat wird der Säule hinzugefügt. Sobald das getaggte Protein spezifisch an Strep-Tactin™ gebunden ist, werden die Wirtsproteine schnell mit kleinen Mengen physiologischen Waschpuffers abgewaschen.
Schritt 3:
Anschließend wird das gebundene Strep-tag™II-Protein schonend eluiert, indem zusätzlich Waschpuffer hinzugefügt wird, der zusätzlich 2.5 mM Desthiobiotin, das speziell für die Biotin-Bindungstasche konkurriert. Da die Pufferbedingungen während der Elution im Wesentlichen unverändert bleiben, werden potenziell unspezifisch bindende Proteine (ohne Strep-tag™) nicht eluiert und kontaminieren somit das betreffende Protein nicht. Neben der spezifischen Bindung von Strep-tag™ an Strep-Tactin™ ist dies die zweite Spezifität, die den Schritt dieses Reinigungsverfahrens darstellt und eine extrem hohe Proteinreinheit ergibt.
Schritte 4 und 5:
Zur Regeneration der Säule wird der gelbe Azofarbstoff HABA (2 - [4 -Hydroxy-benzenazo] Benzoesäure) im Übermaß zugesetzt, um Desthiobiotin aus der Bindungstasche zu verdrängen. Sobald HABA an die Bindungsstelle bindet, wechselt die Farbe zu rot und zeigt so auf komfortable Art und Weise den Regenerations- und Aktivitätsstatus der Säule an.
Schritt 6:
HABA kann durch Zugabe von Waschpuffer problemlos entfernt werden. Wenn die rote Farbe verschwunden ist, kann die Säule wieder verwendet werden. Strep-Tactin™ Harz kann regeneriert und 3 bis 5 Mal ohne Leistungsverlust wiederverwendet werden.
Strep-Tactin™ Harze
für die Strep-tag™-Affinitätsreinigung. Es sind mehrere Versionen an Strep-Tactin™ Harzen erhältlich, die sich in ihren Eigenschaften und in ihrer Anwendung unterscheiden. Während Strep-Tactin™ Sepharose™ bevorzugt für die Schwerkraftfluss-Chromatographie zum Einsatz kommt, kann Strep-Tactin™ Superflow™, das neue Strep-Tactin™Superflow™ (hochkapazitiv) sowie Strep-Tactin™ MacroPrep™ auch für Niederdruck-, FPLC- und HPLC-Anwendungen und ferner Strep-Tactin™ POROS™ (20 und 50) für FPLC- und HPLC-Chromatographie verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Superflow besonders für erhöhte Flussraten und zur Reinigung großer Proteinkomplexe.
H-PR-Kartuschen (hochdruckfest) (Nr. 5)
Die H-PR-Kartuschen sind hauptsächlich für den Einsatz mit Chromatographie-Arbeitsstationen konzipiert, die 10 bis 32 Anschlüsse (z. B. HPLC und AKTA™) nutzen. Über gemeinsame Adapter lassen sie sich jedoch auch mit anderen Arbeitsstationen, Spritzen oder Peristaltikpumpen betreiben. Da die Säulengehäuse sehr druckfest (bis zu 20 Bar) sind, können H-PR-Kartuschen mit einer Durchflussbegrenzung verwendet werden. Die Kartuschen können zwecks Kapazitätserhöhung in Reihe geschaltet werden.
Kurze Tags haben keinen Einfluss auf das Protein

• Schnelle Reinigung in einem Arbeitsschritt unter physiologischen Bedingungen
• Unübertroffene Reinheit und Bioaktivität