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Thermo Scientific™ LightShift™ EMSA Optimization and Control Kit
Identifizieren und charakterisieren Sie Interaktionen zwischen Proteinen und DNA durch EMSA mit diesem außerordentlich stabilen und empfindlichen System.
Marke: Thermo Scientific™ 20148X
218.67 CHF gültig bis 2025-07-04
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Beschreibung
Das Thermo Scientific™ LightShift Chemilumineszenz-EMSA-Kit ist ein außerordentlich stabiles und empfindliches System für elektrophoretische Mobilität-Shift-Assays (EMSA) zur Identifizierung und Charakterisierung von Protein-DNA-bindenden Wechselwirkungen.
Das Kit enthält Reagenzien für die Einrichtung und Anpassung von DNA-bindenden Reaktionen, ein Kontrollset bestehend aus DNA- und Proteinextrakt zum Testen der Kit-Systeme, stabilisiertes Streptavidin-HRP-Konjugat zum Sondieren des mit Biotin markierten DNA-Ziels sowie ein besonders empfindliches chemoilumineszierendes Substratmodul für die Detektion. Das Prinzip der LightShift™ EMSA-Detektion entspricht dem Western Blot. Die mit Biotin endmarkierte Duplex-DNA wird mit einem nuklearen Extrakt oder einem gereinigten Faktor inkubiert und auf einem nativen Gel elektrophoresiert. Die DNA wird anschließend schnell (30 Minuten) zu einer positiven Nylonmembran übertragen, UV-vernetzt, mit Streptavidin-HRP-Konjugat sondiert und mit dem Substrat inkubiert. Das Protokoll von der Markierung bis zu den Ergebnissen kann innerhalb eines Tages fertiggestellt werden. Für den Assay werden nur das gereinigte DNA-Ziel, das mit Biotin endmarkiert wurde, das zu testende Proteinextrakt, Nylonmembran sowie elementare Elektrophoreseinstrumente benötigt. DNA-Ziele können mit 5'- oder 3'-Biotinmarkierungen versehen oder nach der Synthese mit dem Thermo Scientific Biotin 3'-End-DNA-Markierungskit (Art.-Nr. 89818) markiert werden. Nukleäre, zytosolische oder Gesamtzell-Proteinextrakte können durch verschiedene Methoden gewonnen werden, z. B. mit dem Thermo Scientific NE-PER Reagenzkit für die nukleäre und zytoplasmatische Extraktion (Bestellnr. 78833).Besondere Merkmale:
- Das mitgelieferte EBNA-Kontrollsystem unterstützt neue Anwender bei der Entwicklung von funktionierenden Assays und beim Nachvollziehen der Methoden zur Bestätigung von Spezifitäten bei der Bindungsinteraktion
- Hervorragend geeignet für den Nachweis von Proteinen mit geringer Häufigkeit in nukleären Extrakten
- Höhere Empfindlichkeit als bei radioaktiven Methoden und Methoden mit Digoxigenin
- Kompatibel mit bereits bestehenden Bindungsbedingungen für weit verbreitete DNA-Protein-Interaktionen
Spezifikation
| EMSA-Assay | |
| Kit | |
| myECL™ Imager, Röntgenfilm | |
| LightShift EMSA Optimierungs- und Kontroll-Kit | |
| Nicht zielspezifisch |
| Ausreichend für: 100 Bindungsreaktionen • 10 X Bindungspuffer, 1 ml • Biotin-EBNA Kontroll-DNA, 50 µl • Nicht markierte EBNA-DNA, 50 µl • EBNA-Extrakt, 125 µl • Poly (dI·dC), 125 µl • 50 % Glycerol, 500 µl • 1 % NP-40, 500 µl • 1 M KCl, 1 ml • 100 mM MgCl2, 500 µl • 200 mM EDTA pH 8,0, 500 µl • 5 X Ladepuffer, 1 ml Lagerung bei -20 °C. |
|
| 10-fach Bindungspuffer (1 ml), Biotin-EBNA Kontroll-DNA (50 µl), nicht markierte EBNA-DNA (50 µl), EBNA-Extrakt (125 µl), Poly dI·dC (125 µl), 50%iges Glycerol (500 µl), 1%iges NP-40 (500 µl), 1M KCl (1 ml), 100 mM MgCl2 (500 µl), 200 mM EDTA pH 8,0 (500 µl), 5-fach Ladepuffer (1 ml) | |
| LightShift™ | |
| 100 Reaktionen | |
| Gelverschiebung |
Aktionen
-
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Thermo Scientific™ LightShift™ EMSA Optimization and Control Kit > Kontroll-Kit
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