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Thermo Scientific™ LanthaScreen™ TR-FRET-ER alpha Koaktivator-Assay-Kit für LXR-alpha
Beschreibung
Das LanthaScreen™ TR-FRET ER alpha Coaktivator Assay Kit verwendet eine ER alpha Liganden-bindende Domäne (ER-alpha-LBD), die mit Glutathion-S-Transferase (GST) markiert ist, einen Terbium(Tb)-markierten Anti-GST-Antikörper und ein Fluorescein-markiertes Coaktivator-Peptid in einem gebrauchsfertigen homogenen Assay-Format.
Agonisten-Modus
Um den LanthaScreen TR-FRET ER alpha Coaktivator Assay im Agonisten-Modus durchzuführen (zur Identifizierung agonistischer Verbindungen), wird ER-alpha-LBD zu den Ligandentestverbindungen hinzugefügt, gefolgt von der Zugabe einer Mischung aus Fluorescein-Coaktivatorpeptid und Tb-anti-GST-Antikörper. Nach einer Inkubationszeit bei Raumtemperatur wird das TR-FRET 520:495 nm-Emissionsverhältnis berechnet und zur Bestimmung der EC50 aus einer Dosis-Reaktions-Kurve der Verbindung verwendet. Auf der Grundlage der Biologie der ER-alpha-Coaktivatorpeptid-Interaktion ist dieser Liganden-EC50-Wert ein zusammengesetzter Wert, der die Menge des Liganden darstellt, die erforderlich ist, um an den Rezeptor zu binden, eine Konformationsänderung zu bewirken und das Coaktivatorpeptid zu rekrutieren.
Antagonisten-Modus
Um den LanthaScreen TR-FRET ER alpha Coaktivator Assay im Antagonisten-Modus auszuführen (zur Identifizierung von Antagonisten), wird ER-Alpha-LBD zu Ligandentestverbindungen hinzugefügt, gefolgt von einer Mischung aus Agonist, Fluorescein-Coaktivatorpeptid und Terbium(Tb)-markiertem Anti-GST-Antikörper. Die in diesem Modus verwendete Konzentration von Agonisten ist die EC80-Konzentration, die durch die erste Ausführung des Assays im Agonisten-Modus bestimmt wurde.
Spezifikation
Spezifikation
| Inhalt und Lagerung | 1 Röhrchen ER alpha Ligand Binding Domain Rekombinantes Protein (bei -68 bis -85 °C lagern) 1 Röhrchen Peptid (bei -5 bis -30 °C lagern) 2 Flaschen TR-FRET Puffer (bei -5 bis -30 °C lagern) 1 Röhrchen Tb-Anti-GST Ab (bei -5 bis -30 °C lagern) 1 Röhrchen DTT (Bei -5 bis -30 °C lagern) |
| Zur Verwendung mit (Anwendung) | Assay für Interaktionen mit Kofaktoren, Kernrezeptorassay |
| Produktlinie | LanthaScreen |
| Menge | 800 x 20 μL Assays |
| Typ | TR-FRET ER alpha-Koaktivator-Assay-Kit |
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
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