Invitrogen™ IRS-1 Human ProcartaPlex™ Simplex Kit​

Das ProcartaPlex Human IRS-1 Simplex Kit misst den Gesamtgehalt von IRS-1 in Zelllysaten. Es ist so konzipiert, dass es mit anderen Simplex-Kits kombiniert werden kann, sodass Sie Ihr eigenes Multiplex-Panel erstellen können, das die Luminex xMAP-Technologie für die Proteindetektion/Quantifizierung nutzt. Zur Kombination mehrerer Simplex-Kits (d. h. wenn Sie kein vorkonfiguriertes Multiplex-Panel verwenden), wird nur ein Puffer-Kit (separat erhältlich) für jede Assay-Platte benötigt, unabhängig von der Plex-Größe.

Zur Herstellung von Zelllysaten empfehlen wir die Verwendung von ProcartaPlex Zelllysepuffer (Kat. -Nr. EPX-999999-901) oder Zellextraktionspuffer (Kat. -Nr. FNN0011) ergänzt mit 0,5 M EDTA und Halt Protease- und Phosphatase-Inhibitor Einweg-Cocktail (100x) (Kat. Nr. 78440). Diese Puffer sind nicht im Lieferumfang des Panels enthalten. Je nach Zellsystem können auch andere Puffer geeignet sein.

Über ProcartaPlex-Assays für die Luminex-Plattform

ProcartaPlex-Immunoassays basieren auf dem Prinzip eines Sandwich-ELISA, bei dem zwei hochspezifische Antikörper, die an unterschiedliche Epitope eines Proteins binden, zur gleichzeitigen Quantifizierung aller Proteinziele mit einem Luminex Gerät verwendet werden. ProcartaPlex Multiplex-Assays benötigen nur 25 μl Plasma oder Serum oder 50 μl und liefern analysierte Ergebnisse in nur vier Stunden.

• Mehr Ergebnisse pro Probe—gleichzeitige Messung mehrerer Proteintargets in einer einzigen 5–50 μl-Probe
• Bewährte Luminex Technologie – Vielfach referenzierte Multiplexing-Plattform für den Nachweis und die Quantifizierung von Proteinen

Bei ProcartaPlex Assays kommt die Luminex xMAP (Multianalyt-Profiling) Technologie für die gleichzeitige Detektion und Quantifizierung von bis zu 80 Proteinzielen in einer einzigen 25–50 μl-Probe aus Plasma, Serum, Zellkulturüberstand, Zelllysat und anderen Körperflüssigkeiten zum Einsatz.

Die Luminex-Beads im ProcartaPlex-Assay sind intern mit präzisen Anteilen roter und infraroter Fluorophore eingefärbt, um spektral einzigartige Signaturen zu erzeugen, die von den Luminex xMAP-Detektionssystemen (z. B. Luminex 200, FLEXMAP 3D, xMAP INTELLIFLEX, xMAP INTELLIFLEX DR-SE und MAGPIX) identifiziert werden können. Ähnlich wie bei einem Sandwich-ELISA verwendet der ProcartaPlex Assay zusammenpassende Antikörperpaare, um das zu untersuchende Protein zu identifizieren. In einem Multiplex-Assay wird jeder spektral einzigartige Bead mit spezifischen Antikörpern für ein einzelnes Zielprotein markiert, und gebundene Proteine werden mit biotinylierten Antikörpern und Streptavidin–R-Phycoerythrin (RPE) identifiziert. Die Konjugation von Protein-spezifischen Antikörpern an bestimmte Beads ermöglicht die Analyse mehrerer Ziele in einem einzelnen Well.

Darüber hinaus bietet das xMAP INTELLIFLEX DR-SE System Dual-Reporter-Funktion, die die Messung eines zweiten Parameters des Analyten ermöglicht, und verfügt über seitliche Auswurfffunktionen für zusätzliche Flexibilität und Automatisierung. Zusammen mit ProcartaPlex Signalassays ermöglicht das xMAP INTELLIFLEX DR-SE Gerät die Quantifizierung und Multiplexing von phosphorylierten und Gesamtproteinen im gleichen Well, auf demselben Luminex Bead und im gleichen Assay-Lauf.

Der wichtigste Unterschied zwischen einem ProcartaPlex Assay und ELISA besteht darin, dass der Capture-Antikörper im ProcartaPlex Assay mit einem Bead konjugiert ist und nicht per Adsorption am Mikrotiterplatten-Well haftet, weshalb die ProcartaPlex Assay-Reagenzien frei in der Lösung schwimmen. Zum Nachweis verfügt das Luminex 200 Gerät beispielsweise über zwei Laser, einen zur Unterscheidung der spektralen Signatur jedes Beads und den zweiten zur Quantifizierung der RPE-Fluoreszenz, die proportional zur in der Probe vorhandenen Proteinmenge ist. Mit ProcartaPlex Multiplex-Assays können mehr Zielproteine mit deutlich weniger Proben in der gleichen Zeit profiliert werden, die für die Durchführung eines herkömmlichen Sandwich-ELISA benötigt wird.