Invitrogen™ Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit for Sequencing, with One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli

Jedes Kit verwendet den pCR™4Blunt TOPO Vektor mit spezieller Sequenzierung der Primerstellen, die bei jeder Reaktion mehr Insertsequenz und weniger Vektorsequenz ergeben. Diese Kits enthalten alles Notwendige zur Klonierung und Selektion rekombinanter Vektoren, die das PCR-Fragment Ihrer Wahl enthalten.

pCR-4Blunt-TOPO-Vektor : Optimiert zur Sequenzierung

Ein Großteil der multiplen Klonierungsstellen wurde vom pCR-4Blunt-TOPO Vektor entfernt, um den Abstand zwischen Sequenzierprimer- und Insert-Stelle auf maximal 33 bp zu verkürzen. Dies bedeutet, dass Sequenzierreaktionen weniger Vektorsequenz und mehr Insertsequenz ergeben. Der pCR4Blunt TOPO Vektor bietet Bindungsstellen für vier standardmäßige Sequenzierprimer: M13 forward, M13 reverse, T7 und T3. Davon enthalten die Kits je einen Aliquot.

pCR4Blunt TOPO Klon-Selektion und -Manipulation

Der pCR4Blunt TOPO Vektor enthält Ampicillin- und Kanamycin-Resistenzmarker und eine LacZα-ccdB-Genfusion für die Positivselektion und das Blau-Weiß-Screening. Die minimierte multiple Klonierungsstelle des Vektors umfasst abgrenzende EcoRI-Schnittstellen für eine vereinfachte Exzision klonierter PCR-Produkte und eine einzigartige Sse8387I-Stelle für Nested Deletions vor der Sequenzierung. T7- und T3-Promoter sind auch für die In-vitro-Transkription vorhanden.

Vereinfachte TOPO basierte Klonierung

Mit dem TOPO Verfahren sind für die Klonierung weder PCR-Primer mit spezifischen integrierten Sequenzen, noch Post-PCR-Verfahren, eine Vektorpräparation oder andere zeitintensive Schritte zur DNA-Manipulation erforderlich. Geben Sie Ihre PCR-Reaktion einfach dem mitgelieferten Vektor mit gebundener Topoisomerase hinzu, warten Sie 5 Minuten, und führen Sie die Transformation in kompetente E. coli-Zellen durch.

Effiziente Klonierung

Mit bis zu 95 % der Klone, die das gewünschte Insert tragen, können Sie das Screening der Klone reduzieren und somit Zeit und Geld sparen. Der in diesem Kit verwendete pCR-4Blunt-TOPO Vektor enthält keine Überhänge für eine effiziente Ligation von PCR-Produkten, die durch thermostabile Proofreading-Polymerasen, PCR-Produkte mit stumpfem Ende generieren.

Der Standard für die Klonierung

Bei der Klonierung ist das TOPO Verfahren seit über zehn Jahren für Tausende von Wissenschaftlern ein verlässlicher Partner. Die schnelle, einfache und effiziente TOPO Klonierung kam bereits bei einer Vielzahl von Vektoren und in unterschiedlichsten Anwendungen zum Einsatz.

Zero Blunt TOPO PCR-Klonierungs-Kit für die Sequenzierung – Kit-Formate

Das Zero Blunt TOPO PCR-Klonierungs-Kit für die Sequenzierung ist mit einer Vielzahl kompetenter Zellen erhältlich, die verschiedene Vorteile entsprechend Ihren Anforderungen bieten:

• Allgemeine Klonierung: Top10-Zellen (Kat.-Nr. K2875-J10, K2875-20, K2875-40)
• Hocheffiziente Klonierung: TOP10 Electrocomp™ Zellen (Kat.-Nr. K2880-20, K2880-40)
• Klonierung allgemein, Resistenz gegen Bakteriophagen T1: DH5α-T1R (Kat.-Nr. K2895-20)
• Schnelles Wachstum: Mach1™-T1 R chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. K2835-20)

Chromatin-Biologie, Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP), Klonierung, Methylierungsanalyse, PCR-Klonierung, RNAi, Epigenetik und Non-Coding RNA-Forschung, Sequenzierung von Bisulfit-Treated DNA