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Invitrogen™ TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencing, with One Shot™ MAX Efficiency™ DH5α-T1R E. coli

Eine hocheffiziente, 5-minütige Klonierungsstrategie in einem Schritt (“TOPO-Klonierung”) zum direkten Einfügen von mittels Taq-Polymerase amplifizierter PCR-Produkte in einen Plasmidvektor für die Sequenzierung

Marke:  Invitrogen™ K459501

820.04 CHF gültig bis 2024-03-29
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Additional Details : Gewicht : 0.04000kg

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Artikelnummer. 10104512

  • 1230.00 CHF / 1 Stück
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Includes: Topoisomerase I-aktivierte PCR™ 4-TOPO™ Vektor; PCR-Puffer; Salzlösung; dNTPs; Kontrollvorlage; T3, T7, M13-Vorwärts- und M13-Rückwärts-Primer; Kontroll-PCR-Primer; steriles Wasser; One Shot™ chemisch kompetent oder Electrocomp™ E. coli; S.O.C.-Medium; Supercoiled pUC19-Kontrollplasmid

Beschreibung

Beschreibung

Diese Kits enthalten alle notwendigen Bestandteile für die Klonierung und Auswahl rekombinanter Vektoren, die das PCR-Fragment Ihrer Wahl enthalten. Jedes Kit nutzt den pCR™4-TOPO TA-Vektor mit spezieller Sequenzierung der Primerstellen, die bei jeder Reaktion mehr Insert-Sequenz und weniger Vektorsequenz ergeben.
pCR4-TOPO TA-Vektor: Optimiert zur Sequenzierung
Ein Großteil der multiplen Klonierungsstellen wurde vom pCR4-TOPO TA-Vektor entfernt, um den Abstand zwischen Sequenzierprimer- und Insert-Stelle auf maximal 33 bp zu verkürzen. Dies bedeutet, dass Sequenzierreaktionen weniger Vektorsequenz und mehr Insertsequenz ergeben. Der pCR4-TOPO TA-Vektor bietet Bindungsstellen für vier Standardsequenzierprimer: M13 forward, M13 reverse, T7 und T3. Davon enthalten die Kits je einen Aliquot.
pCR4-TOPO TA Klon-Selektion und -Manipulation
Der pCR4-TOPO TA-Vektor enthält Ampicillin- und Kanamycin-Resistenzmarker und eine LacZα-ccdB-Genfusion für die Positivselektion und das Blau-Weiß-Screening. Die minimierte multiple Klonierungsstelle des Vektors umfasst abgrenzende EcoRI-Schnittstellen für eine vereinfachte Exzision klonierter PCR-Produkte und eine einzigartige Sse8387I-Stelle für Nested Deletions vor der Sequenzierung. T7- und T3-Promoter sind auch für die In-vitro-Transkription vorhanden.
Vereinfachte TOPO-basierte Klonierung
Mit dem TOPO-Verfahren sind für die Klonierung weder PCR-Primer mit spezifischen integrierten Sequenzen, noch Post-PCR-Verfahren, Vektorpräparation oder andere zeitintensive Schritte zur DNA-Manipulation erforderlich. Geben Sie Ihre PCR-Reaktion einfach zum mitgelieferten Vektor mit gebundener Topoisomerase, warten Sie 5 Minuten, und führen Sie die Transformation in kompetente E. coli-Zellen durch.
Effiziente Klonierung
Mit bis zu 95 % der Klone, die das gewünschte Insert tragen, können Sie das Screening der Klone reduzieren und somit Zeit und Geld sparen. Der in diesem Kit verwendete pCR4-TOPO TA-Vektor enthält 3'T-Überhänge für eine effiziente Ligation von Taq-amplifizierten PCR-Produkten mit 3'A-Überhängen.
Der Standard für die Klonierung
Seit über zehn Jahren verlassen sich Tausende Wissenschaftler bei der Klonierung auf das TOPO-Verfahren. Die schnelle, einfache und effiziente TOPO Klonierung kam bereits bei einer Vielzahl von Vektoren und in unterschiedlichsten Anwendungen zum Einsatz.
TOPO TA Cloning Kits für die Sequenzierung: Kit-Optionen
Das TOPO TA Cloning Kit für die Sequenzierung ist mit einer Vielfalt kompetenter Zellen erhältlich, die verschiedene Vorteile entsprechend Ihrer Anforderungen bieten:

  • Allgemeine Klonierung: TOP10 (Kat.-Nr. K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
  • Hocheffiziente Klonierung: TOP10 Electrocomp™ Zellen (Kat.-Nr. K4580-01, K4580-40)
  • Klonierung allgemein, Resistenz gegen Bakteriophagen T1: DH5α-T1R (Kat.-Nr. K4595-01, K4595-40)
  • Schnelles Wachstum: Mach1™-T1R chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. K4530-20)
Eine Version des Kits umfasst ein PureLink™ Quick Plasmid-Miniprep-Kit (Bestell- Nr. K4575-02) für die Isolierung von sauberem, sequenzbereiten, rekombinanten Plasmid und ist ebenfalls erhältlich.

  • Mehr Sequenzen: Sie erhalten mehr Insertsequenz und weniger Vektorsequenz als bei der Verwendung von standardmäßigen Sequenzierprimern
  • Schnell und einfach: Von der PCR zum Klon in nur drei Schritten und 5 Minuten
  • Effizient: Bis zu 95 % Klone mit dem korrekten Insert
  • Bewährt: Zuverlässige Leistung seit über einem Jahrzehnt mit über 4.000 Referenzen
TOPO TA Cloning Kits für die Sequenzierung – Übersicht
  • VEKTOR: pCR4-TOPO TA-Vektor: Optimierter Klonierungsvektor für verbesserte Sequenzierungsergebnisse
  • Klonierungsmethode: TOPO TA Cloning: Topoisomerase I-basiert, 5-minütige Ligation von PCR-Produkten mit 3'-A-Überhängen (Taq-amplifiziert) zum Vektor
  • Kompetente Zellen: Verschiedene Optionen: Wählen Sie aus den Kits mit allgemeinen, hocheffizienten, bakteriophagen T1-resistenten oder schnell wachsenden kompetenten Zellen

Chromatin-Biologie, Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP), Klonierung, Methylierungsanalyse, PCR-Klonierung, RNAi, Epigenetik und Non-Coding RNA-Forschung, Sequenzierung von Bisulfit-Treated DNA

Spezifikation

Spezifikation

DH5α
Box 1:
• Topoisomerase-I-aktivierter pCR™4-TOPO™ Vektor
• PCR-Puffer
• Salzlösung
• dNTPs
• Kontroll-Template
• T3-, T7-, M13 Vorwärts- und M13-Rückwärts-Primer
• Kontroll-PCR-Primer
• steriles Wasser

Bei -5 bis -30 °C lagern.
Alle Reagenzien sind bei ordnungsgemäßer Lagerung 6 Monate lang stabil.

Box 2:
• One Shot™ chemisch kompetente oder Electrocomp™ E. coli
• S.O.C.-Medium
• Superhelikales pUC19-Kontrollplasmid

Bei -68 bis -85 °C lagern.
Chromatin-Biologie
Klonierungskit
25 Reaktionen
Topo™-TA
Kit
One Shot™
T7, T3
TOPO TA-Klonierungsvektoren
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