Invitrogen™ SuperScript™ III One-Step RT-PCR System mit Platinum™ Taq DNA Polymerase

Das SuperScript® III One-Step RT-PCR-System mit Platinum® Taq DNA-Polymerase ist für die empfindliche und reproduzierbare Endpunktdetektion und -analyse von RNA-Molekülen per RT-PCR konzipiert. Mit dieser praktischen Formulierung können Sie in nur einem Schritt cDNA-Synthese und PCR-Amplifikation in einem einzelnen Röhrchen mit genspezifischen Primern und Target-RNAs, entweder von Gesamt-RNA oder mRNA, durchführen. Das System verwendet eine Mischung aus SuperScript® III Reverse Transkriptase und Platinum® Taq DNA-Polymerase in einem optimierten Reaktionspuffer und kann eine Vielzahl von RNA-Zielsequenzen von 200 bp bis 4,5 kb detektieren. Die Menge des Ausgangsmaterials kann im Bereich von 0,01 pg bis 1 µg Gesamt-RNA liegen. Entscheidende Vorteile dieses Kits:

• Empfindlich – routinemäßiger Nachweis bis 0,01 pg Gesamt-RNA (siehe Abbildung)
• Anwenderfreundlichkeit – schnelles und praktisches Ein-Schritt-Verfahren mit weniger Variabilität zwischen Reaktionen
• Spezifität – Einsatz von SuperScript® III RT zur cDNA-Synthese bei bis zu 55 °C für ein spezifischeres Priming mit genspezifischen Primern (siehe Abbildung)
• Amplikongröße – kompatible Erkennung von Zielen bis 4,5 kb Länge für größere Flexibilität

SuperScript® III Reverse Transkriptase
SuperScript® III Reverse Transkriptase ist eine Version von M-MLV-RT, die zur Reduzierung der RNase H-Aktivität entwickelt wurde und eine höhere thermische Stabilität bietet. Das Enzym kann cDNA bei Temperaturen von 45 – 60 °C synthetisieren und bietet höhere Spezifität, eine höhere cDNA-Ausbeute und mehr Produkt in voller Länge als andere reverse Transkriptasen. Da SuperScript® III RT nicht signifikant von Ribosomal- und Transfer-RNA gehemmt wird, kann es für die Synthetisierung von cDNA aus Gesamt-RNA verwendet werden.

Platinum® Taq-DNA-Polymerase
Platinum® Taq-DNA-Polymerase ist eine rekombinante Taq-DNA-Polymerase mit firmeneigenem Antikörper, der die Polymerase-Aktivität bei Raumtemperatur blockiert. Die Aktivität wird wiederhergestellt, nachdem bei der Denaturierung während der PCR eine Temperatur von 94 °C erreicht wird. Dies bietet einen automatischen „Heißstart“ in der PCR und dadurch eine höhere Empfindlichkeit, Spezifität und Ausbeute.