Invitrogen™ BLOCK-iT™ Lentiviral RNAi Gateway™ Vector Kit

Ein neuartiges Klonierungsverfahren setzt ein ca.50 bp-DNA-Oligonukleotid unmittelbar nach einem U6 Pol III Promoter in den BLOCK-iT U6-Eingabevektor. Das Oligonukleotid wurde entwickelt, um RNA zu exprimieren, die eine Haarnadelstruktur bildet, die die Sense- und Antisense-Bereiche Ihres Zielgens enthält. Diese shRNA wird dann in den pLenti6/BLOCK-iT-DEST-Vektor neu kombiniert. Nach viraler Produktion und Transduktion wird die vom U6-Promotor angetriebene shRNA stabil als RNAi-Kassette integriert. Die erzeugte shRNA vermeidet den Wirtsverteidigungsmechanismus und ist effektiv bei der Herstellung der RNAi Gen-Knockdown-Reaktion. Mit dem BLOCK-iT lentiviralen RNAi-Expressionssystem kann eine langfristige Analyse der Genblockierung sowohl in teilenden als auch nicht teilenden Säugetierzelltypen und Tiermodellen erzielt werden.

Das BLOCK-iT RNAi U6 Eingabevektor-Kit ermöglicht das rationalisierte Klonen von shRNA-Zielsequenzen für Tests in transienten Experimenten. Ausgewählte RNAi Expressionskassetten werden über eine Standard-Gateway LR-Rekombinationsreaktion schnell und effizient aus dem BLOCK-iT RNAi U6 Eingabevektor in den pLenti6/BLOCK-iT-DEST-Vektor rekombiniert.

• attR-Stellen für eine effiziente Rekombination mit dem attL-flankierten U6 Gateway™ Eingabevektor, der die RNAi-Kassette enthält
• Alle erforderlichen Komponenten für eine effiziente lentivirale Verpackung und die Abgabe der zu untersuchenden shRNA
• Blasticidin-Auswahlmarker für die schnelle, effiziente Auswahl stabiler Zelllinien, die die shRNA exprimieren

Klonierung, Gateway-Klonierung, lentivirale shRNA und miRNA, RNAi, RNAi, Epigenetik und Non-Coding-RNA-Forschung, virusbasierte RNAi