Invitrogen™ Galactose Colorimetric Detection Kit

Beschreibung

Das Galaktose-Nachweiskit für Forschungszwecke ist ein kolorimetrischer Assay, der zur Quantifizierung und Detektion von Galaktose in Serum, Plasma, Puffern und Gewebekulturmedien entwickelt wurde.

Dieses gebrauchsfertige Komplettkit enthält durchsichtige 96-Well-Mikrotiterplatte(n), Galaktose-Standard, Assaypuffer und andere Komponenten zur Durchführung des Assays. Für die Verwendung dieses Kits ist ein 96-Well-Mikrotiterplatten-Lesegerät erforderlich, das die optische Absorption bei 560 nm ablesen kann.

Leistungsmerkmale
• Assay-Typ: kolorimetrisches Nachweiskit
• Probentypen: Serum, Plasma, Puffer, und Gewebekulturmedien
• Empfindlichkeit: 0,493 mg/dl
• Standardkurvenbereich: 0,78 – 25 mg/dl
• Reaktivität: artunabhängig

Hintergrund
Galaktose ist ein Hexose-Zucker, der sich von Glukose nur durch die Konfiguration der Hydroxylgruppe an der Kohlenstoff-4-Position unterscheidet. Dieses Monosaccharid ist als anomere Mischung aus Alpha-D-Galaktose und Beta-D-Galaktose vorhanden und kommt reichlich in Milch, Milchprodukten und vielen anderen Lebensmittelarten, wie etwa Obst und Gemüse, vor. Die Absorption von Galaktose beim Menschen wird durch die Na+/Glukose-Kotransporter SGLT1 und SGLT2 aus Lebensmitteln über die Pinselrandmembran des proximalen Jejunums und des renalen Epithels vermittelt. Weitere Galaktosequellen sind die endogene Produktion und die natürliche Fluktuation von Glykolipiden und Glykoproteinen.

In den Zellen wird Beta-D-Galaktose durch die Wirkung einer Mutarotase zu Alpha-D-Galaktose epimerisiert. Alpha-D-Galaktose wird anschließend durch das Enzym Galaktokinase in Galaktose-1-Phosphat (Gal-1-P) umgewandelt. In Gegenwart von Galaktose-1-Phosphat-Uridyltransferase reagiert Gal-1-P mit UDP-Glukose zu UDP-Galaktose und Glukose-1-Phosphat. Glukose-1-Phosphat kann in den glykolytischen Weg gelangen oder mit UTP reagieren, wenn eine Glukose-Pyrophosphorylase vorhanden ist, um ein neues UDP-Glukose-Molekül zu bilden. Dieser Enzymweg umfasst den evolutionär konservierten Leloir-Weg des Galaktose-Metabolismus.

Assay-Prinzip
Das Galaktosekit für den kolorimetrischen Nachweis wurde entwickelt, um Galaktose in einer Vielzahl von Proben quantitativ zu messen. Zur Erzeugung einer Standardkurve für den Assay wird ein D-(+)-Galaktose-Standard bereitgestellt und alle Proben sollten von der Standardkurve abgelesen werden. Die Proben werden mit der Substrat- und Meerrettich-Peroxidase und der Reaktion gemischt, die durch Zugabe von Galaktose-Oxidase ausgelöst wird. Die Platte wird 30 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert. Die Galaktose-Oxidase reagiert mit Galaktose, um Wasserstoffperoxid zu erzeugen, das in Gegenwart von HRP mit dem farblosen Substrat reagiert, um ein rosafarbenes Produkt zu erzeugen, das bei 560 nm abgelesen werden kann. Steigende Galaktose-Konzentrationen führen zu einer linearen Farbsteigerung.