Thermo Scientific™ T4 RNA Ligase (10 U/μl)

Beschreibung

T4 RNA Ligase katalysiert die ATP-abhängige intra- und intermolekulare Bildung von Phosphodiesterbindungen zwischen 5'-Phosphat und 3'-Hydroxyenden von Oligonukleotiden, einsträngiger RNA und DNA.

Das Substrat muss mindestens ein Nukleosid-3',5'-biphosphat für intermolekulare Reaktion und ein 8-Basen-Oligonukleotid für intramolekulare Reaktion sein.

• Quelle: E.-coli-Zellen mit einem geklonten Gen 63 von T4-Bakteriophagen
• Molekulargewicht: 43,6 kDa Monomer

• Die Abwesenheit von Ribonukleasen, Exo-, Endodesoxyribonukleasen und Phosphatasen wurde durch geeignete Qualitätstests bestätigt.

• E.coli-Zellen mit einem klonierten Gen 63 des T4-Bakteriophagen

Molekulargewicht:

• 43,6 kDa Monomer

Definition der Aktivitätseinheit:

• Eine Einheit katalysiert die Bildung von 1 nmol von 5 ft-[³²P]-(A)_12-18 in einer phosphatasebeständigen Form in 30 Minuten bei 37°C.
• Die Enzymaktivität wird in folgender Mischung gemessen: 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 10 μM 5'-[³²P]-(A)_12-18 (10 μM in 5 ft.-Enden)

Lagerungspuffer:

• Das Enzym wird mit 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 1 mM DTT, 50 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 0,03 % (v/v) ELUGENT Reinigungsmittel und 50 % (v/v) Glycerin geliefert

10X Reaction Buffer:

• 500 mM Tris-HCl (pH 7,5 bei 25°C), 100 mM MgCl₂, 100 mM DTT, 10 mM ATP

Hemmung und Inaktivierung:

• Hemmstoffe: Metallchelatoren, die SH-Gruppe modifizierende Reagenzien (8).
• Inaktivierung durch 10-minütiges Erhitzen auf 70°C.

Empfohlen für:

RNA 3'-Endmarkierung mit Cytidin 3',5'-bis [Alpha-32P]-Phosphat (1); Verbindung von RNA mit RNA (2); Synthese von Oligoribonukleotiden und Oligodeoxyribonukleotiden (3, 4); spezielle Modifikationen von tRNAs (5); Oligodeoxyribonukleotid-Ligation mit einzelsträngigen cDNAs für 5 ft. RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) (6); ortsspezifische Erzeugung von zusammengesetzten Primern für PCR (7)

Hinweis:

Die empfohlene BSA-Konzentration im Reaktionsgemisch beträgt 0,1 mg/ml.