Thermo Scientific™ PagI (BspHI) (10 U/μL)

5'...T▵C A T G A...3'

3'...A G T A C▵T...5'

Bedingungen für 100 % Aktivität:

• 1x Buffer O 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 bei 37°C), 10 mM MgCl₂, 100 mM NaCl und 0,1 mg/ml BSA
• Bei 37°C inkubieren

Lagerungspuffer:

• PagI wird geliefert in: 10 mM Tris-HCl (pH 7,4 bei 25°C), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0,2 mg/ml BSA und 50 % (v/v) Glycerin

Ligation und erneutes Schneiden:

• Nach 50-fachem Verdau mit PagI können über 95 % der DNA-Fragmente ligiert und erneut geschnitten werden

Methylierungseffekte:

• Dam: möglicherweise Überlappung — Spaltung behindert
• Dcm: keine Überlappung — keine Auswirkung
• CpG: keine Überlappung — keine Auswirkung
• EcoKI: keine Überlappung — keine Auswirkung
• EcoBI: möglicherweise Überlappung — Spaltung behindert

Verdauung von Agarose-eingebetteter DNA:

• Es sind mindestens 5 Units der Enzyme für den vollständigen Verdau von 1 μg in Agarose eingebetteter Lambda-DNA in 16 Stunden erforderlich

Kompatible Enden:

• AflIII, PscI, DsaI, Eco130I, NcoI

Hinweis:

Eine geringe Salzkonzentration, eine hohe Glycerin-Konzentration (>5 %), ein pH-Wert von >8,0 oder ein hoher Enzymüberschuss können zu Star-Aktivität führen. Die Spaltung mit PagI wird durch überlappende dam-Methylierung behindert. Verwenden Sie zur Vermeidung von dam-Methylierung einen dam-, dcm-Stamm wie z. B. GM2163 (Nr. M0099).