Thermo Scientific™ Eco47III (AfeI) (10 U/l)

Beschreibung

Lambda-DNA verdaut mit Eco47III (AfeI), 0,7 % Agarose, 2 Spaltstellen

Herkömmliche Restriktionsendonukleasen sind eine große Ansammlung hochwertiger Restriktionsenzyme, die für den Einsatz in einem der Puffer des Fünf-Puffer-Systems optimiert sind. Darüber hinaus bietet der universelle Tango Puffer Vorteile bei Doppelverdauungen. Alle Enzyme zeigen unter den empfohlenen Puffer- und Reaktionsbedingungen 100 % Aktivität. Um eine konsistente Enzymleistung zu gewährleisten, enthalten Thermo Scientific Restriktionsenzym-Puffer vorgemischtes BSA, welches die Stabilität zahlreicher Enzyme verbessert und Schadstoffe bindet, die in DNA-Proben enthalten sein können.

5'...A G C▵G C T...3'

3'...T C G▵C G A...5'

Bedingungen für 100 % Aktivität:

• 1x Puffer O:50 mM Tris-HCl (pH 7,5 bei 37°C), 10 mM MgCl₂, 100 mM NaCl und 0,1 mg/ml BSA
• Bei 37°C inkubieren

Lagerungspuffer:

• Eco47III wird geliefert in:10 mM Tris-HCl (pH 7,4 bei 25 °C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0,2 mg/ml BSA und 50 % (v/v) Glycerin

Ligation und erneutes Schneiden:

• Nach 50-fachem Verdau mit Eco47III können über 80 % der pBR322-DNA-Fragmente ligiert und über 90 % davon erneut geschnitten werden

Methylierungseffekte:

• Dam: keine Überlappung – keine Auswirkung
• Dcm: keine Überlappung – keine Auswirkung
• CpG: vollständige Überlappung – blockiert
• EcoKI: keine Überlappung – keine Auswirkung
• EcoBI: möglicherweise Überlappung – Auswirkung unbestimmt

Verdauung von Agarose-eingebetteter DNA:

• Es sind mindestens 5 U der Enzyme für den vollständigen Verdau von 1 μg in Agarose eingebetteter Lambda-DNA in 16 Stunden erforderlich