Thermo Scientific™ ECO31I (BsaI) (10 U/l)

5'...G G T C T C (N)₁▵...3'

3'...C C A G A G (N)₅▵...5'

Bedingungen für 100 % Aktivität:

• 1x Puffer G:10 mM Tris-HCl (pH 7,5 bei 37°C), 10 mM MgCl₂, 50 mM NaCl und 0,1 mg/ml BSA
• Bei 37°C inkubieren

Lagerungspuffer:

• Eco31I wird geliefert in:10 mM Tris-HCl (pH 7,5 bei 25°C), 200 mM KCl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA, 0,2 mg/ml BSA und 50 % (v/v) Glycerin

Ligation und erneutes Schneiden:

• Nach 50-fachem Verdau mit Eco31I können über 95 % der DNA-Fragmente ligiert und erneut geschnitten werden

Methylierungseffekte:

• Dam: keine Überlappung – keine Auswirkung
• Dcm: möglicherweise Überlappung – Spaltung behindert
• CpG: möglicherweise Überlappung – Spaltung behindert
• EcoKI: keine Überlappung – keine Auswirkung
• EcoBI: möglicherweise Überlappung – Auswirkung unbestimmt

Verdauung von Agarose-eingebetteter DNA:

• Es sind mindestens 5 U der Enzyme für den vollständigen Verdau von 1 μg in Agarose eingebetteter Lambda-DNA in 16 Stunden erforderlich

Hinweis:

Mit Lambda-DNA (dcm-) (#SD0021) getestet, da einer der beiden Eco31I-Erkennungsstellen in Lambda-DNA schwer zu spalten ist. Die Spaltung mit Eco31I wird durch überlappende dcm-Methylierung behindert. Verwenden Sie zur Vermeidung von dcm-Methylierung einen dam- oder dcm-Stamm wie z. B. GM2163 (Nr. M0099). Eine geringe Salzkonzentration, eine hohe Glycerin-Konzentration (>5 %), ein pH-Wert von >8,0 oder ein hoher Enzymüberschuss können zu Star-Aktivität führen. Eco31I spaltet flussabwärts von seinem Erkennungsort und kann jede gewünschte 4-Base-5'-Überhänge generieren. Diese Funktion ist für das direkte Klonen von PCR-Produkten nützlich.