Thermo Scientific™ CellSensor™ AP-1-bla A375 Cell Line

Die CellSensor® AP1-bla A375-Zelllinie enthält ein Beta-Lactamase-Reportergen, das unter Kontrolle des AP1-Response-Elements steht, welches stabil in A375-Zellen integriert ist. A375-Zellen sind humane Melanomkrebszellen, die die endogene B-Raf-Mutation V600E enthalten, was zu einer konstitutiven B-Raf-Kinaseaktivität führt. Die CellSensor® AP1-bla A375-Zelllinie ist eine mittels Durchflusszytometrie auf Grundlage der konstitutiven Expression von Beta-Lactamase isolierte klonale Population. Diese Zelllinie wurde mit verschiedenen niedermolekularen Raf-Inhibitoren sowie mit B-Raf Stealth RNAi™ siRNA validiert. Darüber hinaus wurde diese Zelllinie unter variablen Bedingungen wie DMSO-Konzentration, Zellzahl, Substanzinkubationszeit und Substratladezeit auf Assayleistung getestet und für Z'-Faktor und IC50-Konzentrationen von Raf1-Inhibitor I validiert. Die RAF-Genfamilie (RAF1, A-RAF und B-RAF) codiert nah verwandte Serin/Threonin-Proteinkinasen, die wichtige Effektoren der Ras-Aktivierung sind. Raf1 und A-Raf sind selten mutiert, während Mutationen in B-Raf bei menschlichen Krebserkrankungen, insbesondere bei Melanomen, häufig vorkommen. B-Raf ist bei etwa 70 % der menschlichen Melanome, 35 bis 70 % der papillären Schilddrüsenkarzinome und seltener bei Lungen- und Dickdarmkrebs mutiert. Die Mutationen befinden sich meist in der B-Raf-Kinase-Domäne und bei Melanomen handelt es sich ganz überwiegend um V600E-Missense-Mutationen, die zur Aktivierung der B-Raf-Kinase führen. Die konstitutive Aktivität von B-Raf V600E kann direkt zur Aktivierung des Mek/MAPK-Signalwegs führen. Daher könnte die Hemmung der B-Raf/Mek/MAPK-Signalgebung eine mögliche Methode zur Behandlung von Melanomen und anderen Tumoren mit mutiertem B-Raf sein.