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Invitrogen™ Block-iT™ Vektorkit für die Expression von induzierbarer Pol II miR RNAi mit EmGFP
Beschreibung
The BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kits combine the advantages of traditional RNAi vectors (stable expression and the ability to use viral delivery) with capabilities for tissue-specific expression and multiple target knockdown from the same transcript. The BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kits and the BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR RNAi Expression Systems are designed to express artificial miRNAs which are engineered to have 100% homology to your target sequence and will result in target cleavage. Using Invitrogen's award-winning BLOCK-iT™ RNAi Designer, over 70% of constructs produce more than 70% knockdown.
BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi-Expressionsvektorkits vereinen die Vorteile herkömmlicher RNAi-Vektoren (stabile Expression und Möglichkeit der viralen Übertragung) mit der Fähigkeit zur gewebespezifischen Expression und zum Knockdown mehrerer Ziele desselben Transkripts Das BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi-Expressionsvektorkit und BLOCK-iT™ lentivirale Pol II miR RNAi-Expressionssysteme dienen zum Exprimieren künstlicher miRNAs, die mit 100 % Homologie für Ihre Zielsequenz konzipiert wurden und eine Zielspaltung zur Folge haben. Mit dem preisgekrönten BLOCK-iT™ RNAi Designer von Invitrogen erzeugen über 70 % der Konstrukte einen Knockdown von mehr als 70 %. Die Invitrogen Pol II-Expressionsfamilie der Vektoren umfasst:
–Starke Expression aus dem CMV Immediate-Early Promotor, mit der Möglichkeit zur Verwendung gewebespezifischer bzw. anderer regulierter Promotoren über MultiSite Gateway™-Rekombination.
–Kompatibilität mit vielen Invitrogen Gateway™-Zielvektoren (DEST) für die Genexpression.
–Fähigkeit zum Steuern der Initiierung der RNAi-Reaktion mit einem neuen BLOCK-iT™ induzierbare Pol II miR RNAi Expressionsvektorkit mit EmGFP.
–Ein neuer Zielvektor im BLOCK-iT™ HiPerform™ Lentiviral Pol II miR RNAi-Expressionssystem mit EmGFP. Der neue Vektor enthält eine mRNA-stabilisierende Sequenz (WPRE) und eine nukleäre Importsequenz (CPPT), die bis zu 5-mal so hohe Virustiter und EmGFP-Expressionsstufen erzeugen. Zusätzlich wird die Blasticidin-Resistenz vom PGK-1-Promotor der Maus exprimiert, um einen Shutdown nach mehreren Passagen zu vermeiden.
–Co-cistronische Expression von smaragdgrün fluoreszierendem Protein (Emerald GFP, EmGFP), was zu einer Korrelation der EmGFP-Expression mit Knockdown aus Ihrer miR RNAi führt.
–Expression von mehr als einer künstlich veränderten miR RNAi-Sequenz auf dem gleichen Transkript, was den gleichzeitigen Knockdown mehrerer Gene und die Erzeugung synthetischer Phänotypen ermöglicht
Das neue BLOCK-iT™ Inducible Pol II miR RNAi Expressionsvektorkit mit EmGFP ermöglicht das Steuern von RNAi-Experimenten. Dieses Kit enthält den pT-REx-DEST30 Gateway™ Vektor, der nach einfachen Klonierungs- und Shuttle-Techniken einen miR RNAi Expressionsvektor erzeugt, der für einen induzierbaren Knockdown geeignet ist. Der pT-REx-DEST30 Gateway™ Vektor enthält den CMV-Promotor mit zwei Kopien der Tetracyclin-Anwendersequenz (tetO2), die eine regulierte Expression auf hohem Niveau ermöglicht. Dies ermöglicht die Untersuchung des Funktionsverlusts in einer stabil transfizierten Zelllinie, auch wenn das Gen von Interesse wesentlich ist. Außerdem kann die Induktion der miR RNAi-Expression gestoppt werden, sodass phänotypische Veränderungen während der Wiederherstellung der Genfunktion gemessen werden können.
Für eine Vielzahl von Expressionsoptionen kann die miR-RNAi-Kassette, die EmGFP (nur pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR-Vektor), miR-flankierende Bereiche und eine miRNA enthält, die homolog zum Ziel von Interesse ist, problemlos in eine Vielzahl von DEST-Vektoren verschoben werden. Dies geschieht durch Gateway™ Rekombinationsreaktionen, bei denen die miR RNAi-Kassette in einen pDONR™ Vektor (BP-Reaktion) und dann in einen DEST-Vektor (LR-Reaktion) der Wahl übertragen wird. Das HiPerform™ System verfügt über den neuen pLenti6.4/RF R2/V5-DEST-Zielvektor für hohe Virustiter und EmGFP-Expression.
–Starke Expression aus dem CMV Immediate-Early Promotor, mit der Möglichkeit zur Verwendung gewebespezifischer bzw. anderer regulierter Promotoren über MultiSite Gateway™-Rekombination.
–Kompatibilität mit vielen Invitrogen Gateway™-Zielvektoren (DEST) für die Genexpression.
–Fähigkeit zum Steuern der Initiierung der RNAi-Reaktion mit einem neuen BLOCK-iT™ induzierbare Pol II miR RNAi Expressionsvektorkit mit EmGFP.
–Ein neuer Zielvektor im BLOCK-iT™ HiPerform™ Lentiviral Pol II miR RNAi-Expressionssystem mit EmGFP. Der neue Vektor enthält eine mRNA-stabilisierende Sequenz (WPRE) und eine nukleäre Importsequenz (CPPT), die bis zu 5-mal so hohe Virustiter und EmGFP-Expressionsstufen erzeugen. Zusätzlich wird die Blasticidin-Resistenz vom PGK-1-Promotor der Maus exprimiert, um einen Shutdown nach mehreren Passagen zu vermeiden.
–Co-cistronische Expression von smaragdgrün fluoreszierendem Protein (Emerald GFP, EmGFP), was zu einer Korrelation der EmGFP-Expression mit Knockdown aus Ihrer miR RNAi führt.
–Expression von mehr als einer künstlich veränderten miR RNAi-Sequenz auf dem gleichen Transkript, was den gleichzeitigen Knockdown mehrerer Gene und die Erzeugung synthetischer Phänotypen ermöglicht
Das neue BLOCK-iT™ Inducible Pol II miR RNAi Expressionsvektorkit mit EmGFP ermöglicht das Steuern von RNAi-Experimenten. Dieses Kit enthält den pT-REx-DEST30 Gateway™ Vektor, der nach einfachen Klonierungs- und Shuttle-Techniken einen miR RNAi Expressionsvektor erzeugt, der für einen induzierbaren Knockdown geeignet ist. Der pT-REx-DEST30 Gateway™ Vektor enthält den CMV-Promotor mit zwei Kopien der Tetracyclin-Anwendersequenz (tetO2), die eine regulierte Expression auf hohem Niveau ermöglicht. Dies ermöglicht die Untersuchung des Funktionsverlusts in einer stabil transfizierten Zelllinie, auch wenn das Gen von Interesse wesentlich ist. Außerdem kann die Induktion der miR RNAi-Expression gestoppt werden, sodass phänotypische Veränderungen während der Wiederherstellung der Genfunktion gemessen werden können.
Für eine Vielzahl von Expressionsoptionen kann die miR-RNAi-Kassette, die EmGFP (nur pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR-Vektor), miR-flankierende Bereiche und eine miRNA enthält, die homolog zum Ziel von Interesse ist, problemlos in eine Vielzahl von DEST-Vektoren verschoben werden. Dies geschieht durch Gateway™ Rekombinationsreaktionen, bei denen die miR RNAi-Kassette in einen pDONR™ Vektor (BP-Reaktion) und dann in einen DEST-Vektor (LR-Reaktion) der Wahl übertragen wird. Das HiPerform™ System verfügt über den neuen pLenti6.4/RF R2/V5-DEST-Zielvektor für hohe Virustiter und EmGFP-Expression.
Spezifikation
Spezifikation
| Produkttyp | Block-iT™ Vektorkit für die Expression von induzierbarer Pol II miR RNAi mit EmGFP |
| Beschreibung | BLOCK-iT™ Vektorkit für die Expression von induzierbarer Pol II miR RNAi mit EmGFP, 20 Reaktionen, flüssig, CMV/TO-Promotor, Transfektionseinbringungsmethode, Gateway™ Klonierungsmethode, BLOCK-iT RNAi-Vektortyp, Induktionssystem, GFP (EmGFP)-Reporter, |
| Zur Verwendung mit (Anwendung) | RNAi, Epigenetik und nicht-codierende RNA-Forschung, vektorbasierte RNAi |
| Anzahl Reaktionen | 20 |
| Vektor | BLOCK-iT RNAi-Vektoren |
| Format | Kit |
| Gen | GFP (EmGFP) |
| Inhalt und Lagerung | Das BLOCK-iTTM induzierbare Pol II miR RNAi Expressionsvektorkit mit EmGFP enthält eine Klonierungsbox mit linearisierter pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR, 10 x Annealing-Puffer, T4-DNA-Ligase, 5 x DNA-Ligationspuffer, lacZ-Kontroll-Oligo, lacZ-Kontrollplasmid, negativem Kontrollplasmid, DNase/RNase-freiem Wasser sowie Primer für die Vorwärts- und Rückwärts-Sequenzierung. Dieses Kit enthält auch das pT-REx-DEST30 Gateway™ Vektorkit (mit pT-REx-DEST30- und pT-REx/GW-30/lacZ-Vektoren) und das T-RExTM Regulationsmodul (mit pcDNA™6/TR und Tetracyclin). Die Gateway™ LR und BP Clonase™ Kits, Blasticidin und pDONRTM221 sind im Lieferumfang enthalten. Vektoren, Puffer, Kontrolloligo und Plasmide, Antibiotika, Clonase-Kits, Wasser und Sequenzierungsprimer bei -20 °C lagern. Die One Shot™ Box enthält Transformationsreagenzien, darunter 21 50 µl-Aliquote von One Shot™ TOP10 chemisch kompetenten E. coli, SOC-Medium und ein superhelikales pUC19-Kontrollplasmid. Diese Transformationsreagenzien bei -80 °C lagern. |
| Klonierungsmethode | Gateway™ |
| Konstitutives oder induktives System | Induzierbar |
| Mehr anzeigen |
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
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