Invitrogen™ BLOCK-iT™ HiPerform™ Lentiviral Pol II miR RNAi Expression System with EmGFP

BLOCK-iT™ Pol II miR-RNAi-Expressionsvektorkits vereinen die Vorteile herkömmlicher RNAi-Vektoren (stabile Expression und Möglichkeit der viralen Übertragung) mit der Fähigkeit zur gewebespezifischen Expression und zum Knock-down mehrerer Ziele desselben Transkripts. BLOCK-iT™ Pol II miR-RNAi-Expressionsvektorkits und BLOCK-iT™ Lentivirus Pol II miR-RNAi-Expressionssysteme sind so konzipiert, dass sie künstliche miRNAs exprimieren, die eine 100%ige Homologie zu Ihrer Zielsequenz aufweisen und zu einer Zielspaltung führen. Mit dem preisgekrönten BLOCK-iT™ RNAi Designer von Invitrogen erzeugen über 70 % der Konstrukte einen Knock-down von mehr als 70 %. Die Invitrogen Pol II-Expressionsfamilie der Vektoren umfasst Folgendes:

–Starke Expression des unmittelbar frühen CMV-Promoters mit der Option zur Verwendung von EF-1α, gewebespezifischen Promotern oder anderen Promotern über die MultiSite Gateway™ Rekombination.
–Kompatibilität mit vielen Invitrogen Gateway™ Zielvektoren (DEST-Vektoren) für die Genexpression.

–Fähigkeit zur Steuerung der Initiierung der RNAi-Reaktion mit einem neuem BLOCK-iT™ Induzierbarem Pol II miR-RNAi-Expressionsvektorkit mit EmGFP (Art.-Nr. K493900).
–Ein neuer Zielvektor im BLOCK-iT™ HiPerform™ Lentivirus Pol II miR RNAi-Expressionssystem mit EmGFP. Der neue Vektor enthält eine mRNA-stabilisierende Sequenz (WPRE) und eine nukleäre Importsequenz (cPPT), die bis zu 5-mal so hohe Virustiter und EmGFP-Expressionsniveaus erzeugen. Zusätzlich wird der Blasticidin-Widerstand vom PGK-1-Promotor der Maus exprimiert, um eine Abschaltung nach mehreren Durchgängen zu vermeiden.

–Co-cistronische Expression von Emerald GFP (EmGFP), was zu einer Korrelation von EmGFP-Expression mit dem Knock-down aus Ihrer miR-RNAi führt.

–Expression von mehr als einer entwickelten miR-RNAi-Sequenz auf demselben Transkript, wodurch der Knock-down mehrerer Gene gleichzeitig und die Erzeugung synthetischer Phänotypen ermöglicht wird.

Das neue BLOCK-iT™ Induzierbare Pol II miR-RNAi-Expressionsvektorkit mit EmGFP ermöglicht die Steuerung von RNAi-Experimenten. Dieses Kit enthält den pT-REx-DEST30 Gateway™ Vektor, der nach einfachen Klonierungs- und Shuttle-Techniken einen miR-RNAi-Expressionsvektor erzeugt, der für einen induzierbaren Knock-down geeignet ist. Der pT-REx-DEST30 Gateway™ Vektor enthält den CMV-Promotor mit zwei Kopien der Tetracyclin-Operator-Sequenz (tetO2) für eine regulierte Expression auf hohem Niveau. Dies ermöglicht die Untersuchung des Funktionsverlusts in einer stabil transfizierten Zelllinie, auch wenn das Gen von Interesse wesentlich ist. Außerdem kann die Induktion der miR RNAi-Expression gestoppt werden, sodass phänotypische Veränderungen während der Wiederherstellung der Genfunktion gemessen werden können.

Für eine Vielzahl von Expressionsoptionen kann die miR-RNAi-Kassette, die EmGFP (nur pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR-Vektor), miR-flankierende Bereiche und eine miRNA enthält, die homolog zum Ziel von Interesse ist, problemlos in eine Vielzahl von DEST-Vektoren verschoben werden. Dies geschieht durch Gateway™ Rekombinationsreaktionen, bei denen die miR RNAi-Kassette in einen pDONR™ Vektor (BP-Reaktion) und dann in einen DEST-Vektor (LR-Reaktion) der Wahl übertragen wird. Das HiPerform™ System verfügt über den neuen pLenti6.4/R4R2/V5-DEST-Vektor für hohe Virustiter und EmGFP-Expression.