Applied Biosystems™ AmpliTaq Gold™ DNA-Polymerase mit Puffer II und MgCl₂

Beschreibung

Die Applied Biosystems™ AmpliTaq Gold™ DNA Polymerase ist eine chemisch modifizierte Form der AmpliTaq™ DNA Polymerase. Die thermische Aktivierung des Standard Hot-Start-Enzyms erhöht die Sensitivität bei Amplifikationen von Genen mit geringer Kopienzahl. Es eignet sich gut für Templates von einer Grösse von bis zu 3 kb.
Die Platinum™ Hot-Start-Technologie ermöglicht eine hohe Spezifität für eine höhere Ausbeute. Patentierte Antikörper binden an das aktive Zentrum der Polymerase und inhibieren dadurch die Enzymaktivität bei niedrigen Temperaturen. Über 90% der Polymeraseaktivität wird im ersten Denaturierungsschritt wiederhergestellt, im Gegensatz zu anderen Hot-Start-Verfahren, wo z.B. Modifikationen an der Polymerase selbst die Wiederherstellung der kompletten Aktivität verhindern (Bild 1). Die Platinum™ Hot-Start-Methode ist besonders geeignet für PCR-Methoden mit kurzen Protokollen.
Die AccuPrime™ Taq DNA-Polymerase sorgt für eine bessere spezifische Bindung von Primern und ermöglicht dadurch eine Genauigkeit, die mit anderen Hot-Start-Enzymen nicht erreicht werden kann. Zusammen mit dem Hot-Start-Antikörper liefert das patentierte AccuPrime™ Hilfsprotein eine zusätzliche Kontrolle gegen Mispriming durch Interaktionen von Template und Primern und erleichtert dem Primer die Bindung an seine spezifische Zielsequenz. AccuPrime™ ist ideal für anspruchsvolle PCR-Applikationen, wie z.B. Multiplex-PCR: In Bild 2 wurden bis zu 20 verschiedene Targetsequenzen amplifi ziert, alle zeigten nur eine spezifische Bande.
Bild 1: Die Reaktion wurde bei 94ºC im mitgelieferten Reaktionspuffer inkubiert. Aliquots wurden zu verschiedenen Zeitpunkten genommen und in einem Standard-Aktivitätstest bewertet.
Bild 2: Jede Spur von links nach rechts zeigt die wachsende Zahl an Primer-Paaren (1 bis 20), eingesetzt in einem 50uL PCR-Reaktionsgefäss. Die PCR wurde auf Eis pipettiert, verwendet wurden 200 ng K562 humane genomische DNA und 5 units AccuPrime™ Taq DNA-Polymerase. Das Protokoll enthielt 35 Zyklen (94ºC 15 Sekunden, 60ºC 30 Sekunden, 68ºC 60 Sekunden).
Puffer I: beinhaltet bereits 15 mM MgCl2
Puffer II: mit separater 25 mM MgCl2-Lösung
Hersteller: N8080243 Art.-Nr.
Beschreibung: AmpliTaq Gold™ DNA Polymerase with Buffer II
Packung: 6 x 250 units