Invitrogen™ Alexa Fluor™ 680 NHS Ester (Succinimidyl Ester)

Alexa Fluor™ 680 ist ein heller und photostabiler Nahinfrarot-Farbstoff, der dem Cy5.5-Farbstoff bezüglich seines Spektrums ähnlich ist. Der Farbstoff Alexa Fluor™ 680, der für eine stabile Signalerzeugung in der Bildgebung und Durchflusszytometrie verwendet wird, ist wasserlöslich und im Bereich von pH 4 bis pH 10 pH-unempfindlich. Die Fluoreszenz dieses langwelligen Alexa Fluor™ Farbstoffs ist für das menschliche Auge nicht sichtbar, wird jedoch von den meisten Bildgebungssystemen leicht erkannt. Zusätzlich zu Reaktivfarbstoff-Formulierungen bieten wir Alexa Fluor™ 680 konjugiert mit einer Vielzahl von Antikörpern, Peptiden, Proteinen, Markierungssubstanzen und Amplifikationssubstraten, die für die Markierung und den Nachweis von Zellen optimiert wurden, an. (Erfahren Sie mehr.)

Der NHS-Ester (oder Succinimidylester) von Alexa Fluor™ 680 ist das beliebteste Hilfsmittel für die Konjugierung dieses Farbstoffs mit einem Protein oder Antikörper. NHS-Ester können zur Markierung der primären Amine (R-NH₂) von Proteinen, Amin-modifizierten Oligonukleotiden und weiteren aminhaltigen Molekülen verwendet werden. Das entstehende Konjugat mit Alexa Fluor™ weist eine hellere Fluoreszenz und höhere Fotostabilität auf als Konjugate mit anderen Fluorophoren mit ähnlichem Spektrum.

Ausführliche Informationen zu diesem Alexa Fluor™ NHS-Ester:

Fluorophor-Markierung: Alexa Fluor™ 680 Farbstoff
Reaktive Gruppe: NHS-Ester
Reaktivität: Primäre Amine auf Proteinen und Liganden, aminmodifizierte Oligonukleotide
Anregungs-/Emissionsmaxima (Ex/Em) des Konjugats: 684/707 nm
Extinktionskoeffizient: 183.000 cm-1M-1
Farbstoffe mit ähnlichem Spektrum: Cy5.5

Typische Konjugationsreaktion
Amin-Reaktivfarbstoffe können mit praktisch jedem Protein oder Peptid konjugiert werden (das bereitgestellte Protokoll ist für IgG-Antikörper optimiert). Sie können die Reaktion auf beliebige Proteinmengen skalieren, optimale Ergebnisse erzielen Sie jedoch bei einer Proteinkonzentration von mindestens 2 mg/ml. Wir empfehlen Versuche mit drei verschiedenen Markierungsgraden und drei unterschiedlichen molaren Verhältnissen von reaktivem Reagenz zu Protein.

Der Alexa Fluor™ NHS-Ester ist in der Regel in hochwertigem wasserfreiem Dimethylformamid (DMF) oder Dimethylsulfoxid (DMSO) (D12345) gelöst. Die Reaktion erfolgt in 0,1 – 0,2 M-Natriumbicarbonat-Puffer, pH 8,3, bei Raumtemperatur für 1 Stunde. Da der pKa-Wert des Amino-Terminus niedriger ist als der der epsilon-Aminogruppe des Lysins, erreichen Sie möglicherweise eine stärker selektive Markierung des Amino-Terminus mit einem Puffer, der näher am neutralen pH-Wert liegt.

Konjugat-Aufreinigung
Markierte Antikörper werden in der Regel von freiem Alexa Fluor™ Farbstoff durch Einsatz einer Gel-Filtrationssäule wie Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 oder Ähnlichem getrennt. Wählen Sie bei sehr großen bzw. kleinen Proteinen ein Gelfiltrationsmedium mit geeigneter molekularer Ausschlussgrenze (MWCO), oder entscheiden Sie sich für eine Reinigung per Dialyse. Wir bieten verschiedene Aufreinigungskits, die für unterschiedliche Mengen von Antikörperkonjugat optimiert sind:
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 0,5 bis 1 mg (A33086)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 20 bis 50 μg (A33087)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 50 bis 100 μg (A33088)

Weitere Informationen zur Protein- und Antikörpermarkierung
Wir bieten eine breite Auswahl an Molecular Probes™ Antikörper- und Proteinmarkierungskits, passend zu Ihrem Ausgangsmaterial und Ihrer Versuchsanordnung. Weitere Optionen finden Sie unter Antikörper-Markierungskits, oder nutzen Sie unser Auswahlwerkzeug für die Markierungschemie. Weitere Informationen zu unseren Markierungskits finden Sie unter Protein- und Nukleinsäuremarkierungskits—Kapitel 1.2 im Molecular Probes™ Handbuch.


Wenn Sie in unserem Online-Katalog das Gesuchte nicht finden, erstellen wir gern für Sie ein Antikörper- oder Proteinkonjugat nach Ihren individuellen Vorgaben. Unser individualisierter Konjugationsservice arbeitet effizient und absolut vertraulich, und wir stehen ein für die Qualität unserer Arbeit. Wir sind ISO 9001:2000 zertifiziert.