Invitrogen™ alamarBlue™ HS Zellviabilitätsreagenz

Beim Eintritt in lebende Zellen wird Resazurin zu Resorufin reduziert, einer roten und stark fluoreszierenden Verbindung. Hohe Hintergrundfluoreszenz durch verschiedene Kontaminanten reduziert die Leistung von Reagenzien auf Resazurin-Basis. Zur Verbesserung der Leistung wurde ein innovativer Reinigungsprozess entwickelt, der diese Kontaminanten entfernt. Dieses hochgereinigte, ungiftige Resazurin wurde in der Standardformulierung von AlamarBlue verwendet, wodurch das Mehrkomponenten- alamarBlue HS-Zellviabilitätsreagenz entstand. Veränderungen der Lebensfähigkeit lassen sich mit einem Absorptions- oder Fluoreszenz-Plattenlesegerät leicht erkennen. Das alamarBlue HS Zellviabilitätsreagenz ist breit anwendbar und kann mit verschiedenen menschlichen und tierischen Zelllinien, Bakterien, Pflanzen und Pilzen verwendet werden.

Die Funktionen des alamarBlue™ HS Zellviabilitätsreagenzes sind:

• Entfernung von Kontaminanten aus Resazurin — Es tritt eine > 50 %ige Reduzierung der Hintergrundfluoreszenz auf
• Das um > 100% höhere Signal-Hintergrund-Verhältnis — führt zu einem großen Testsignalfenster
• Hochempfindliches Reagenz mit linearer Reaktion — kann kleinste Mengen bis zu 20 Zellen pro Well nachweisen
• Praktisches Format: Add-and-Read — Kein Mischen, kein Waschen, keine Zelllyse und kompatibel mit fluoreszenz- oder absorptionsbasierten Messgeräten
• Misst die Lebensfähigkeit vieler verschiedener Zelltypen — einschließlich Säugetierzellen, Bakterien, Pflanzen und Pilzen

Die Messung von Änderungen der Lebensfähigkeit der Zellen ist eine grundlegende Methode zur Beurteilung der Zellgesundheit, der Bestimmung der Genotoxizität und der Evaluierung von Krebsmedikamenten. Die Zellgesundheit kann durch den Nachweis von Veränderungen in mehreren Schlüsselindikatoren überwacht werden, darunter Veränderungen der Plasmamembranintegrität, DNA-Synthese, DNA-Gehalt, Enzymaktivität, Vorhandensein von ATP und zelluläre Reduktionsumgebung.

Die Überwachung von Veränderungen in der zellulären reduzierenden Umgebung oder der metabolischen Aktivität mit Reagenzien auf Resazurin-Basis ist ein etablierter und zuverlässiger Indikator für die Lebensfähigkeit oder den Tod von Zellen. Beim Eintritt in lebende Zellen reduziert die zelluläre Reduktionsumgebung Resazurin zu Resorufin, einer rot gefärbten und stark fluoreszierenden Verbindung. Lebensfähige Zellen wandeln Resazurin kontinuierlich in Resorufin um und erhöhen so die Gesamtfluoreszenz des Mediums, das die Zellen umgibt. Darüber hinaus führt die Umwandlung von Resazurin zu Resorufin zu einer ausgeprägten Farbveränderung, so dass die Zellviabilität auch mit absorptionsbasierten Plattenlesern nachgewiesen werden kann.

Als Folge der Synthese- und Herstellungsprozesse enthalten alle Reagenzien auf Resazurin-Basis eine nachweisbare Menge an Resorufinkontamination. Die Menge der Kontamination kann zwischen den Quellen des Materials und den Herstellungsbedingungen stark variieren und zu Unterschieden bei der nachweisbaren Hintergrundfluoreszenz beitragen. Noch wichtiger ist, dass das kontaminierende Resorufin das Signal-Hintergrund-Verhältnis und den dynamischen Bereich des Assays reduziert. Es wurde ein innovatives Verfahren entwickelt, das das kontaminierende Resorufin entfernt, was zu dem hochreinen Resazurin führt, das im alamarBlue HS Zellviabilitätsreagenz verwendet wird.

alamarBlue HS Zellviabilitätsreagenz funktioniert vollständig nach der einfachen Hinzufügen und Ablesen-Methode und ist ein ungiftiges Reagenz, das keine Zelllyse erfordert. Das hochaufgereinigte Resazurin, das für das alamarBlue HS Reagenz verwendet wird, führt zu einer > 50%igen Abnahme der Hintergrundfluoreszenz und einer > 100%igen Steigerung des Signal-Hintergrund-Verhältnisses. Da keine Lyse erforderlich ist, kann die verdünnte alamarBlue HS Lösung entfernt und durch ein vollständiges Nährmedium zur weiteren Kultivierung der Zellen ersetzt werden. Ähnlich wie das alamarBlue Reagenz bietet das alamarBlue HS Reagenz ein verlängertes Zeitfenster für den Nachweis der Lebensfähigkeit für eine Vielzahl von Organismen und kann daher mit verschiedenen menschlichen und tierischen Zelllinien, Bakterien, Pflanzen und Pilzen verwendet werden, was zu einer quantitativen Messung der Zellviabilität und -proliferation führt.